【摘要】 荧光分析法灵敏度高,适合于微量或分的测定,曾广泛地应用于生物样本中CA的测定,但这种方法干扰严重,准确性差。

荧光分析法灵敏度高,适合于微量或分的测定,曾广泛地应用于生物样本中CA的测定,但这种方法干扰严重,准确性差。HPLC 与荧光检测器的联用可以显著地抛高生物胺分析的准确性。CA 和脂肪多胺不具有荧光特性,必须先倒成荧光衍生物再进行分离测定。用于生物胺的荧光衍生试剂主要的有丹酰氯(DNS-Cl)和荧光胺(Fluram),DNS-CI可用于伯胺和仲胺类的生物胺,Fluram只能用于伯胺。

 

DNS-Cl同A、NA和DA在最佳条件下进行反应,产生的荧光衍生物检测的最低极限量为50pg 以下,分离的效果良好,图8-4为DNS-CA 的分离情况。HPLC荧光检测测定DA和NA的值比经典的荧光分析法低,这可能是因为经过层析分离后再分别测每种成分的含量,而经典法是在其它成分存在下测定一种成分,有一定的干扰.

 

脂肪二胺和多胺比较重要的有四种:腐胺(Pu)、尸胺(Cd)、精脉(Spd)和精胺(Sp)。此类脂肪胺缺少结构检测的特征,在紫外区亦无吸收,因此在分离前必须与紫外衍生试剂反应生成具有紫外吸收的衍生物。脂肪多胺的对-甲苯磺酰[~和喹啉-8-磺酰"衍生物以硅胶或键合硅胶为填料进行分离也得到满意的结果。荧光色谱法由于检测的灵敏度高,在脂肪多胺的测定方面也得到广泛的应用。在双荧光胺衍生物这样一个较大的分子中,只有一个次甲基的差别即可达到基线分离,分离效果是令人满意的。DNS的衍生物的荧光强度随着荧光衍生试剂在分子内数目的增加而增加,衍生物的保留时间也有同样的关系。

 

【1】张祥民. 现代色谱分析[M]. 复旦大学出版社, 2004.

【2】傅若农, 顾峻岭. 近代色谱分析[M]. 国防工业出版社, 1998.

【3】刘克玲. 实用仪器分析[J]. 国外科技新书评介, 2014(8):1.

【4】李发美. 医药高效液相色谱技术[M]. 人民卫生出版社, 2000.

【5】严拯宇. 中药薄层色谱分析技术与应用[J]. 中国医药科技出版社, 2009.

 

免责声明:部分文章整合自网络,因内容庞杂无法联系到全部作者,如有侵权,请联系删除,我们会在第一时间予以答复,万分感谢。