生物扫描电子显微镜（SEM）-科学指南针

项目简介

生物扫描电镜主要利用二次电子成像拍摄材料的表面三维形貌情况，拍摄照片为黑白照片；一般用来观察细胞外表面的变形以及受损情况等，也可以观察材料在细胞表面的分布情况，广泛应用于检测生物样品、非均相有机材料、无机材料等微米、纳米范围内的表面特征。

结果展示

图1. I和II是真菌的菌丝和分生孢子图，III是材料表面大肠杆菌的附着图

样品要求

服务流程：

送样方式：

可接收固定好的细胞/组织样品并附有详细送检要求的送样单

①需要您提供的样品：收集细胞/组织取样（新鲜迅速取材），置于1.5ml离心管内，加入2.5%的戊二醛溶液（固定液加满离心管，使样品完全浸没在固定液中），放置于4℃保存，请不要倒弃固定液，一般固定12h后可寄送（务必采用1.5ml离心管寄送）。

②打印填写完整的预约单、送样单和样品一起寄送。

样品取材及固定常用方法：

细胞类	10⁶以上的细胞，用细胞刮刀刮下来，1500-3000转离心，5-10min，收集细胞于1.5ml或2ml离心管，管底肉眼可见2-3粒大米状样品，如果细胞量很多，把细胞团块用细针尖挑成几个小团块，弃上清，沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液，固定液完全浸没样品，可放置于4°C保存。
组织类	新鲜取材，取材位置准确，组织大小尽量在1-2mm³，离体取材后请尽快投入4℃预冷的固定液中，固定液完全浸没组织，可放置于4°C保存。
细菌类	吸取OD0.5-0.8的培养物，离心后弃培养基，收集菌体沉淀于管底黄豆大小，可以用PBS洗1-2次，齐上清，沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液，固定液完全浸没样品，可放置于4°C保存。
*固定液的量请参考上图，加至箭头所示位置
*如样品取材及固定有疑问请及时与指南针工作人员沟通

服务周期：

一般为样品接收后的2周左右，如遇法定假期需要顺延，具体实验周期及送样时间请与科学指南针工作人员沟通确认，谢谢！

交付内容：

每样提供8张拍摄图片（不提供分析服务），如需照片数量超过8张将产生额外费用；

结果反馈请在测试完成一周内，不建议回收样品，如有需要请提前反馈给指南针工作人员。

常见问题

1. 2.5%戊二醛固定液如何配置？

市售25%戊二醛水溶液 10ml

0.2M磷酸盐缓冲液（pH7.0） 50ml

蒸馏水加至 100ml

2. 0.2M，pH7.0磷酸缓冲液的配置方法？

A液：Na₂HPO₄·H₂O 31.61g，或者Na₂HPO₄·7H₂O 53.63g，或者Na₂HPO₄·12H₂O 71.64g，加蒸馏水至1000ml

B液：NaH₂PO₄·H₂O 27.6g，或者NaH₂PO₄·2H₂O 31.21g，加蒸馏水至1000ml

0.2M，pH7.0磷酸缓冲液= A液61ml+B液39ml（合起来是100ml）

3. 为什么要加固定液？

固定液是为了保持细胞、组织的固有形态和结构。

4. 扫描电镜制样流程？

新鲜取材后用2.5%戊二醛固定液固定样本，4℃过夜放置，倒掉2.5%戊二醛固定液，用0.1M，pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次，每次15min；用1%的锇酸溶液固定样品1-2h；小心取出锇酸废液，用0.1M，pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次，每次15min；用梯度浓度（包括30%，50%，70%，80%，90%和95%五种浓度）的乙醇溶液对样品进行脱水处理，每种浓度处理15min，再用100%的乙醇处理两次，每次20 min。用乙醇与醋酸异戊酯的混合液（V/V=1/1）处理样品30min，再用纯醋酸异戊酯处理样品1h或放置过夜。临界点干燥/冷冻干燥处理。镀膜，观察。处理好的样品在扫描电镜中观察。