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      等温滴定量热仪(ITC)

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      仪器型号 VP-ITC
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      项目简介

      等温滴定量热法 (ITC) 是用于量化研究各种生物分子相互作用的一种技术,能够通过一次实验同时确定所有结合参数的技术。通过热传递,一般可以得到结合常数(KD)、反应化学量(n)、焓(△H)、熵(△S)。

      测试原理简单地说,是将一种反应物配制成澄清溶液放在一个温控样品池中,通过一个热电偶回路与参比池偶联,另一种反应物作为配体置于注射器中。其中,样品池和参比池通过绝热装置隔开,在恒定温度下,注射器以一定速度向样品池中不断滴加配体,反应一定时间,仪器测量样品池的热量变化并使其与参比池平衡,最终显示为一个吸热或放热的峰。

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      样品要求

      1、样品量或样品尺寸的具体要求:池子样品:不少于4mL;进样针样品:不少于1mL(具体看需看样品测试情况,建议多一点);如样品含固体,需提供溶解和清洗方法;强酸强碱不能检测。

      2、样品性质要求:(1)滴定液(滴定针中):透明均匀液体,无肉眼可见沉淀不能为悬浮液,或随时间或温度变化有固体析出;(2)被滴定液(池体中):最好为透明均匀液体,可为悬浮液,但颗粒不能过大(纳微级尚可接受);(3)滴定过程中避免大量沉淀产生或粘度改变;(4)滴定液和被滴定液pH最好一致,相差最大不能超过0.2pH单位。

      3、样品浓度说明:(1)以摩尔浓度(mM)为标准,一般滴定液是被滴定液的10-20倍,如有参考文献可以参考文献浓度为参照;(2)绝对浓度可以相关参考文献为参照,若无参考文献,对于小分子和蛋白相互作用体系可配制为小分子溶液200µM、蛋白溶液20µM;小分子和小分子之间确认为弱相互作用的体系,滴定针中的小分子溶液可配制为mM级,池体中溶液浓度可参照(1)的浓度比例配制。

      4、样品体积要求:一组样品测试包含滴定液(小分子)和被滴定液(蛋白或大分子)之间以及滴定液和溶剂之间的相互作用,所以滴定液和被滴定液为5mL,缓冲液可准备10mL;若增加滴定的小分子种类,则被滴定液和缓冲液体积则相应增加,同理增加被滴定液种类,则滴定液和缓冲液体积相应增加;推荐按测试组准备样品。

      5、默认放被滴定物的池子体积是1.44ml,一次性加满。

      常见问题

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