【摘要】 通过阴性染色电镜技术首次揭示鸭坦布苏病毒完整形态特征，解析50-75nm球形/细长颗粒结构，阐明黄病毒科E糖蛋白-脂质层-核衣壳三层构造，为动物病毒防治提供关键技术支撑。

核心发现：鸭坦布苏病毒（DTMUV）通过阴性染色电镜技术首次观察到其完整球形/细长颗粒结构，揭示黄病毒科独特包膜特征，为病毒防治提供形态学依据。

 

一、实验关键技术解析

研究团队采用病毒株CQW1（GenBank:KM233707.1）进行系统研究，实验流程包含三大核心步骤：

1.病毒扩增：9日龄鸭胚尿囊腔接种，37℃孵育3天

2.​超速离心纯化：10万g超离3小时 → 不连续蔗糖梯度（30/45/60%）二次纯化 → PBS缓冲液置换

3.​电镜制样：碳膜载网吸附 → 3%磷钨酸负染5分钟 → JEOL JEM-100CX透射电镜（100kV）成像

 

鸭坦布苏病毒电镜成像 分散病毒粒子显微照片

图1 从鸭胚尿囊液中纯化的解离性DTMUV颗粒

 

二、病毒形态特征全解析

通过优化后的样本制备技术，首次获得非聚集态病毒的高清结构数据：

  • ​三维结构：典型包膜病毒构造（外层E糖蛋白→脂质双分子层→核衣壳）
  • ​尺寸特征：50-75nm主体范围（最大100nm+），平均直径60nm
  • ​密度特性：45-60%蔗糖梯度区带富集

 

鸭坦布苏病毒结构 黄病毒科包膜特征解析

图2 由E糖蛋白外结构域、脂质双分子层和内部核衣壳组成的DTMUV的超微结构

 

三、争议数据深度剖析

针对既往30-45nm测量差异，研究提出创新性解释：

  • ​样本处理差异：尿囊液纯化vs细胞感染样本
  • ​成像技术影响：负染技术保真度＞超薄切片（细胞收缩效应）
  • ​功能结构关联：ECV囊泡融合导致感染态病毒形变

特别发现：

病毒衣壳呈现独特六边形轮廓（直径22-45nm），核衣壳间距12nm，E蛋白结构域间距35nm，为黄病毒科分类提供新佐证。

 

四、技术应用前景

本研究建立的负染电镜方案可推广至：

✅ 动物病毒快速鉴定 ✅ 疫苗研发质控 ✅ 抗病毒药物靶点研究

 

参考文献：[1] Luo X, Liu Y, Jia R, et al. Ultrastructure of duck Tembusu virus observed by electron microscopy with negative staining[J]. Acta virologica, 2018, 62(3).

 

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