SEM样品干燥法

在做扫描电子显微镜（SEM）测试时，科学指南针检测平台工作人员在与很多同学沟通中了解到，好多同学对SEM测试不太了解，针对此，科学指南针检测平台团队组织相关同事对网上海量知识进行整理，希望可以帮助到科研圈的伙伴们；

空气干燥法

空气干燥法又称自然干燥法，就是将经过脱水的样品，让其暴露在空气中使脱水剂逐渐挥发干燥。

方法：脱水至无水状态，为减缓其挥发速度，退回至85%脱水剂，取出，空气中自然干燥。

优点：脱水剂为低表面张力物质，挥发过程中减少了样品的收缩及损伤

缺点：常常使样品发生变形收缩

适用范围：铸型或体表比较坚硬的甲壳昆虫等含水量较少的样品

冷冻干燥法

冷冻干燥法是将经过冷冻的样品置于高真空中，通过升华除去样品中的水分或脱水剂的过程。冷冻干燥的基础是冰从样品中升华，即水分从固态直接转化为气态，不经过中间的液态，不存在气相和液相之间的表面张力对样品的作用，从而减轻在干燥过程中对样品的损伤。

方法：将含大量水分的生物样品迅速投入液氮中，使样品冷冻固化，而后将样品移入真空镀膜仪内，在高真空状态下升华，脱水剂直接由固态转为气态，样品随之得到干燥。

优点：不存在气相与液相间的表面张力问题，故对样品损伤较小。

缺点：需特殊的低温条件，易出现冰晶损伤，费时。

适用范围：含水量较多的生物样品

临界点干燥法

临界点干燥法是利用物质在临界状态时，其表面张力等于零的特性，使样品的液体完全汽化，并以气体方式排掉，来达到完全干燥的目的。这样就可以避免表面张力的影响，较好地保存样品的微细结构。此法操作较为方便，所用的时间也不算长，一般约2～3小时即可完成，所以是最为常用的干燥方法。但用此法，需要特殊仪器设备。

临界点干燥是在临界点干燥仪中进行的，操作步骤如下：

1．固定、脱水：按常规方法进行。如样品是用乙醇脱水的，在脱水至100%后，要用纯丙酮置换15～20分钟。

2．转入中间液：由纯丙酮转入中间液醋酸异戊酯中，时间约15～30分钟。

3．移至样品室：将样品从醋酸异戊酯中取出，放入样品盒，然后移至临界点干燥仪的样品室内，盖上盖并拧紧以防漏气。

4．用液体二氧化碳置换醋酸异戊酯：在达到临界状态(31(C , 72.8大气压)后，将温度再升高10(C，使液体二氧化碳气化，然后打开放气阀门，逐渐排出气体，样品即完全干燥。

莰烯干燥法

莰烯是一种樟脑类无色结晶体，能溶于醚、环乙烷、环己烯和氯仿中，室温下呈固体状，能在较低的温度下升华，从固态直接变成气态，表面张力小，故经它干燥的样品较松软，变形小，操作也较简便。

莰烯干燥法是由Warrens．Buk于1971年提出的，其操作步骤如下：

1.取新鲜材料迅速投入0．1mol/L磷酸缓冲液中漂洗，然后投入5％的戊二醛(用磷酸缓冲液配制的pH7.4)中固定1h。

2.转至加有5.4％蔗糖的0．1mol/L磷酸缓冲液中，在冷冻温度下过夜。

3.用l％的四氧化锇(磷酸缓冲液配制)溶液中固定2h。

4.用磷酸缓冲液或双蒸水漂洗2～3次，每次、15min。

5.用30％，50％，70％，90％，95％和100％丙酮脱水，每级15min。

6.用100％的苯脱酯。

7.在1：1苯与环氧丙烷中浸泡15min，再转至纯环氧丙烷中，在45℃下经20min后，转入预先在水浴箱中加温成液体的莰烯中浸透，取出样品装台。

8.放入真空干燥器中，在室温下抽真空1h左右，使莰烯直接从固体中升华，然后镀膜。

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