【摘要】 细胞染色对样品的影响分为3类：促进线粒体代谢、无影响、抑制线粒体代谢。

上一期我们关于细胞染色，我们介绍到对样品的影响分为3类：促进线粒体代谢、无影响、抑制线粒体代谢。本期我们将继续介绍。

其中促进线粒体代谢，不一定会促进细胞增殖；抑制线粒体代谢也不一定会杀死细胞。因此单独的细胞毒性结果说明不了任何问题，只能根据结果得出一下猜想：细胞活性发生变化，有可能是细胞的代谢强度发生了变化，也有可能是细胞的数量发生了变化。具体是什么，需要进一步进行研究。

那么该怎么进一步研究呢？细胞死活染色实验是其中一个简单的确认实验，利用活死细胞染色试剂盒，可以非常清晰的观察到细胞的生存状态。那么活死细胞染色试剂盒的原理是什么呢？常用的试剂盒一般都是Calcein-AM（无荧光）和PI的组合，其中Calcein-AM中的AM基团主要增加疏水性，以便其穿过活细胞细胞膜，当其进入到细胞质后，酯酶会将其水解为Calcein留在细胞内，发出强绿色荧光。只有活细胞可以将Calcein-AM水解，因此Calcein-AM作为活细胞指示剂；而PI只能穿过死细胞的细胞膜，因此作为死细胞指示剂。

细胞死活染色实验其实反映了四个方面的信息，分别是：死活细胞比例、细胞数量、活细胞形态以及死活细胞荧光强度。

 

 

作为初学者，通常只关注死活细胞比例，而忽视其他两方面的信息，因此容易产生文章开头的困惑。其实细胞毒性实验显示有细胞毒性，有可能细胞并没有凋亡，而只是代谢受到抑制，因此细胞状态不好，反映到死活染色实验中，可能表现为细胞形态发生改变，或者活细胞荧光强度发生变化；也有可能是细胞已经凋亡，并且已经从培养瓶壁上脱落，导致细胞数量减少。

从上面的解释中可以看出，细胞毒性实验和细胞死活染色实验是互为补充的，在做实验的过程中，我们不必只从死活细胞的比例这一个方面对两实验的结果进行分析，也可以尝试从其他方面进行解释。

 

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