体积排阻色谱

分子排阻色谱又称体积排阻色谱，该类型色谱多以阶级多孔型凝胶作为固定相，根据流动相不同，分成凝胶渗透色谱和凝胶过滤色谱。其中，凝胶渗透色谱是以邮寄溶剂作为流动相，多用于高聚物的分子量测定。凝胶过滤色谱则是以水溶液或缓冲液作为流动相，多用于蛋白质、酶等生物分子量的测定。体积排阻色谱的分离机理是通过多孔树脂阶级状的孔结构使不同尺寸的分子所能到达的孔洞路径和数量的差异，使大分子以较短的路径率先经过检测器、小分子以较长路径较晚通过检测器，这种现象叫做尺寸筛选效应。

因其独特的分离机理，体积排阻色谱与其他类型色谱具有许多不同之处：首先，溶剂分子是在最后出峰，与其对应的出峰时间和洗脱体积被定义为死时间和死体积；除此之外，该类型色谱分离度较低，凝胶色谱柱的柱容量是有限的，一般只能容纳小于10-12个色谱峰，而并非能像其他色谱分离几十甚至上百上千个化合物。需要注意的是，体积排阻色谱无法应用于分量大小差距小于10%的组分分离。

而对于体积排阻色谱中实际操作，也需要注意一些问题：

（1）体积牌组色谱要求组分与固定相之间尽可能不发生相互作用，即尽可能避免非体积排阻效应的影响，从而避免结果的准确性。

（2） 按分子量范围考虑：应该落在分子量淋出曲线的线性范围，范围过窄可考虑串联使用。

（3） 操作过程中严禁超压，超压会引起凝胶孔结构的破坏，造成色谱的永久性损伤，无法修复。另外，对于色谱柱应注意维护，使用后应以纯水冲洗，长时间不使用，应使用甲醇或叠氮化钠水溶液置换后，密封保存。

【1】张祥民. 现代色谱分析[M]. 复旦大学出版社, 2004.

【2】傅若农, 顾峻岭. 近代色谱分析[M]. 国防工业出版社, 1998.

【3】刘克玲. 实用仪器分析[J]. 国外科技新书评介, 2014(8):1.

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