【摘要】 市场上卖的戊二醛溶液浓度为25%，需要稀释。

在之前的测试中，大家存在了一些疑问，可能同学们在之后的送样测试过程中也会遇到类似的问题，在这部分中我们针对扫描电镜的相关问题进行疑难解答。

1. 2.5%戊二醛固定液如何配置？

市场上卖的戊二醛溶液浓度为25%，需要稀释。戊二醛在碱性条件下或者高温条件下容易聚合使其教练能力下降，因此需要磷酸缓冲液。戊二醛固定液的一般浓度会配置在1-4%左右，2.5%是我们通用的浓度，常用的配置比例如下所示：

市售25%戊二醛水溶液                10ml

0.2M磷酸盐缓冲液（pH7.0）           50ml

蒸馏水加至                          100ml

 

2. 0.2M，pH7.0磷酸缓冲液的配置方法？

A液：Na2HPO4·H2O 31.61g，或者Na2HPO4·7H2O 53.63g，或者Na2HPO4·12H2O 71.64g，加蒸馏水至1000ml

B液：NaH2PO4·H2O 27.6g，或者NaH2PO4·2H2O 31.21g，加蒸馏水至1000ml

0.2M，pH7.0磷酸缓冲液= A液61ml+B液39ml（合起来是100ml）

 

3.为什么要加固定液？

固定液是为了保持细胞、组织的固有形态和结构。

 

4.扫描电镜制样流程？

新鲜取材后用2.5%戊二醛固定液固定样本，4℃过夜放置，倒掉2.5%戊二醛固定液，用0.1M，pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次，每次15min；用1%的锇酸溶液固定样品1-2h；小心取出锇酸废液，用0.1M，pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次，每次15min；用梯度浓度（包括30%，50%，70%，80%，90%和95%五种浓度）的乙醇溶液对样品进行脱水处理，每种浓度处理15min，再用100%的乙醇处理两次，每次20 min。用乙醇与醋酸异戊酯的混合液（V/V=1/1）处理样品30min，再用纯醋酸异戊酯处理样品1h或放置过夜。临界点干燥。镀膜，观察。处理好的样品在扫描电镜中观察。

 

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