【摘要】 总的来说分配层析适用于分离亲水性甾体，而吸附层析更适用于亲脂性甾体的分离。

总的来说分配层析适用于分离亲水性甾体，而吸附层析更适用于亲脂性甾体的分离。Siggia和 Dishman于1970年首先应用HPLC分离甾体激素,用三氟乙烯聚合物(<325目)，外涂18~28%(W/W)正十二碳烯胺，装于50em x 2mm(内径)的玻璃管内,皮质甾体和雄性激素用水洗脱能很好分离;孕甾酮及其他极性小的甾体要加入33%甲醇;雌激素最好用水或包含氢氧化钠(pH 11.5)的含水甲醇来洗脱。四氟乙烯(PTFE)填料(140~325目)具有疏水性,因而能减少拖尾,本身也能作反相层析使用，图9-2是一些皮质甾体的分离。为了避免吸附效应可增加固定液的量，一般来说用10um硅胶可涂50%甲酰胺(W/W)，用二氯甲烷洗脱对于甾体可获得满意的分离。

 

 

三元二相溶剂系统,例如水-乙醇-二氯甲烷,根据甾体化合物极性可用乙醇调节洗脱剂极性。取低极性易动相可满意分离皮质甾体和雌激素。1971年Henryl]描述了涂有B，8-氧二丙腈的Zipax柱上四类甾体(皮质甾体、孕激索、雄性激素和雌性激素)均能分离。自从微粒硅胶键合固定相发展以来,越来越多的甾体分析是应用这类填料。James Q Rose等·用5~6微米Zorbax柱(0.25m x 4.6mm内径)以甲醇:二氯甲烷(3:97)洗脱分离生理体液中的强的松(prednisone)，强的松龙(prednisolone)和皮质醇(cortisol),能检出15ng量。

 

制备性分离可使用大口径柱，例如分离1g胆甾醇苯醋酸酯(cholesteryl phe-nylacetate)可在spherosil XOA-400柱(1m x 23mm内径)上进行,以0.1%甲醇(溶于二氯甲烷)洗脱,估计1g多孔吸附剂或10g薄壳壤料能分离1mg 样品。HPLC与质谱连用已有可能直接鉴定混合物中的甾体成分.

 

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