【摘要】 甲氨蝶呤（Methotrexate）为橙黄色结晶粉末，为抗叶酸类抗肿瘤药。

甲氨蝶呤（Methotrexate）为橙黄色结晶粉末，为抗叶酸类抗肿瘤药。本品口服吸收较好，血中浓度在30～60分钟后达到高峰，经吸收后60%~85%与血浆蛋白结合。生物体液的甲氨蝶呤测定有免疫测定、毛细管电泳、HPLC等方法，HPLC 法具有特异、灵敏等优点，HPLC法与免疫分析法的比较已有研究。HPLC法测定甲氨蝶呤经常使用Cis柱，C柱也有应用，有时梯度洗脱(~。因分子中有共辄双键的含氮杂环，经常用紫外检测器检测，血中定量浓度可至0.03pmol/L."”，也可用荧光检测器检测13·20，定量限可至0.01pg/ml1，样品经紫外光照射后可用荧光检测器检测(15.22，检测浓度可至0.1ng/mi;衍生化后测定"P，检测浓度可低至2ng/ml:电化学检测法亦可应用。血中甲氨蝶呤的测定可用高氯酸、三氯醋酸、乙腈等脱蛋白;或经滤膜滤过液固相提取等方法处理;采用柱切换技术可起到浓缩作用，该法配合紫外检测器的检测限至5ng/ml.

 

1.固相萃取RP-HPLC测定血中的甲氨蝶呤(MTx)aD(1)色谐条件色谱柱:Beckman Ultrasphere ODS柱(15cm×4. 6mm，5um)。流动相:乙腈-缓冲液（0.01mol/L磷酸二氢钾，0.O2mol/L盐酸四甲铵，pH2.5)(10 : 90)。检测:紫外，313nm.

(2)样品测定血清样品 500pul或200pul加内标液(8-氯茶碱用缓冲液配制成4pg/ml ) 1ml,轻微涡旋混合,将该溶液加于依次用甲醇20ml，o. 2mol/L pH6.0磷酸盐缓冲液3ml 处理的Sep-pak Classic.固相萃取柱，靠重力自然流动，如需要略加真空，用水1ml 冲洗。抽真空干燥5min，用甲醇2ml 洗脱,洗出液60℃氮气流吹干。残渣用0.005mol/L盐酸溶解（低浓度、高浓度分别用200pl、300ul)。取溶液100pl进样。血中甲氨蝶呤色谱图见图10-3。保留时间:内标物，10.27min;MTX，13.33min。

(3) 方法准确度和精密度提取回收率(X+SD):低浓度，88.6%士1.4%﹔中浓度，88.0%士1.5%﹔高浓度，91.2%士2.0%。RSD:1.4%~7.1%。

(4) 线性范围和检测限﹐线性范围:0.03~0.30umol/L和0.15~1.Oumol/L。检测限:0. 02pmol/L. (9ng/ml)。

 

【1】张祥民. 现代色谱分析[M]. 复旦大学出版社, 2004.

【2】傅若农, 顾峻岭. 近代色谱分析[M]. 国防工业出版社, 1998.

【3】刘克玲. 实用仪器分析[J]. 国外科技新书评介, 2014(8):1.

【4】李发美. 医药高效液相色谱技术[M]. 人民卫生出版社, 2000.

【5】严拯宇. 中药薄层色谱分析技术与应用[J]. 中国医药科技出版社, 2009.

 

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