【摘要】 克仑特罗(Clenbuterol)(双氯醇胺)为β受体的选择性强效激动剂,其松弛支气管平滑肌作用强而持久,用药量极小。
克仑特罗(Clenbuterol)(双氯醇胺)为β受体的选择性强效激动剂,其松弛支气管平滑肌作用强而持久,用药量极小。克仑特罗盐酸盐溶于水及热乙醇,不溶于乙醚。而其游离形式能溶于乙醚。糖浆剂可以直接进样分析(",装有抗克仑特罗IgG健合相或一般固定相的固相萃取柱都曾用于尿样中克仑特罗的富集和纯化。脑组织匀浆中的克仑特罗能用乙醚、硫酸两步法提取。反相色谱或离子对反相色谱都能用于克仑特罗的分离。克仑特罗的直接紫外检测波长为245nm或230nm。进行偶氮化反应后能在可见波长检测,另外也能进行电化学检测。
1.RP-HPLC测定大鼠脑组织中克仑特罗
(1)色谱条件﹐色谱柱:LC-18-DBC,柱(25cm×4.6mm,5pm)。保护柱:LC-18-DB C,柱《2cm×4.6mm,5pum)。流动相:乙腈-0.05rmol/L磷酸二氢钠-TEA (35∶65 t0.1,用磷酸调节pH3.0)。流速:1.0ml/min。柱温:40℃。检测:紫外,230nm。
(2)样品测定﹑将冷冻脑组织置于4倍体积的0.4mol/L PCA中,每1ml PCA中加入内标物溶液(普萘洛尔1.48pg/ml水溶液)40pul,并用电动匀浆器匀浆(140r /min)。离心15min,转移上清液1ml至 10ml聚丙烯试管内,加入氢氧化钠(10mol/L)10pul和碳酸盐缓冲液(pH9.0)350pl,涡旋混合10s,加入乙醚8ml后,机械振摇45min,离心8min,乙醚层转移至另一聚丙烯试管内,加入0.2mol/L硫酸200pl,再机械振摇15min,离心8min。弃去乙醚层,将试管置于45℃水浴内蒸发除去剩余乙醚。取酸层溶液50pul进样。保留时间:在8min 内出峰顺序为克仑特罗、普萘洛尔(内标物)。
(3)方法准确度和精密度﹑回收率:93.0%~100.0%。日内RSD:24.8% (n=4,浓度为线性范围下限)~4.6%(n=6,浓度为线性范围上限)。
(4)线性范围和检测限线性范围:79~1570ng/ml。检测限:33ng/ml(S/N=3)。
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