【摘要】 第一代慢病毒载体是在野生型的HIV病毒上无义突变gp120蛋白而来。

第一代慢病毒载体是在野生型的HIV病毒上无义突变gp120蛋白而来。一开始使用的是Jurkats细胞和COS-1细胞（一种含SV40病毒大T抗原的猿猴细胞系）来进行慢病毒地生产。所使用的质粒表达的HIV病毒基因组包含失活的env和nef基因。功能性的Env基因和gp160基因载体质粒与和核心质粒进行共转染。早期使用的报告基因一般为氯霉素乙酰转移酶基因(CAT)。这样一来，在这些细胞系中就成功表达出了第一代复制缺陷型慢病毒。这种病毒只能完成一个复制周期，在宿主细胞中复制整合一次。虽然使用CAT报告基因的慢病毒无法进行准确的病毒滴度测定，但是还是能给予人们比较直观的病毒效价概念。

 

精确的慢病毒滴度测定方法最早是Page在1990年创立的75。他在慢病毒载体中添加了大肠杆菌的次黄嘌呤-鸟嘌呤核糖核酸转移酶基因(gpt基因)，这样一来就可以在被转染的细胞中使用霉酚酸进行药物筛选。Gpt基因表达框是由SV40启动子负责启动转录，构建于野生型病毒中被敲除的gp160基因的位置。这个表达框的存在保证了被转染细胞可以通过修补合成途径正常存活。经过浓缩收集获得的慢病毒颗粒转染贴壁的靶细胞，在药筛的作用下杀死未转染细胞，再以细胞的数目间接表示病毒颗粒的数目。通常病毒滴度的单位用每毫升病毒浓缩液中具有转染功能的病毒颗粒数目来表示，单位一般为IU/mL或TU/mL。Page的实验中首次使用其他逆转录病毒的糖蛋白包膜代替了HIV病毒本身的糖蛋白包膜gp160，此后这一方法被广泛采用。

 

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