【摘要】 将慢病毒载体质粒混合物瞬时转染到293T细胞的方法是目前来看生产少量的慢病毒载体最通用的方法。

将慢病毒载体质粒混合物瞬时转染到293T细胞的方法是目前来看生产少量的慢病毒载体最通用的方法。就目前的技术条件来看，进行瞬时转染最方便的方法就是购买商业化的脂质体转染试剂。但是脂质体地使用极大地增加了实验的成本，实验中如果需要数十毫升浓缩后的慢病毒载体，使用脂质体是一件很不合算的事情。因而，实验人员一般采用更常规的磷酸钙（CaPO4）沉淀法或聚乙烯亚胺（PEI）转染法来进行实验。

 

之前人们一直不将质粒转染视为一种能大规模生产慢病毒载体的方法。直到悬浮细胞培养技术成熟发展之后，生物制药领域才将质粒转染的方法引入大规模的病毒生产中。现代的悬浮细胞培养技术已经实现在24-72小时内，高效产出需要的重组蛋白或者慢病毒颗粒。由于磷酸钙沉淀法中需要在转染后更换培养基，PEI成为大规模转染实验中更加合适的转染试剂。即使PEI试剂对细胞有毒性，但是却能为质粒瞬时转染步骤带来极大的便利。

 

为了提高病毒的生产效率，很多人从优化瞬时转染方法的角度出发来进行改进。目前的瞬时转染法中一个重要的限制因素是转染时的细胞密度不能高于2×10°cell/mL,通常以0.5-1×10°cell/mL为最佳。为了提高病毒的包装效率，大量实验室致力于在不影响转染效率的前提下，提高初始细胞密度上限的研究。

 

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