第三代慢病毒载体

第三代慢病毒载体主要致力于提高载体的生物安全性，完全消除病毒载体恢复成致病性慢病毒的可能。Dull等又做了两个新的改进来提高病毒载体的安全性。复制相关基因Tat被敲除，病毒RNA的转录不在依赖Tat，而是利用一个新设计的嵌合型LTR。病毒载体中所有结构蛋白mRNA和反式作用因子mRNA均由人为添加的外源重组启动子来起始转录。在包装形成的慢病毒载体中，病毒RNA 5’端的LTR的U3区域被彻底敲除，而由CMV启动子来代替本来启动子的功能。另一个重要的HIV调节蛋白Rev，被从核心质粒上拆开，放在单独一个质粒上，待到生产病毒时与核心质粒共同转染。正如之前已经介绍过的，没有Rev蛋白的存在，多顺反子未剪切的病毒RNA无法出核，这就导致Gag-Pol mRNA等无法在细胞质中翻译。这两个改进的运用，完全抹杀了包装载体以及后续使用中产生野生型慢病毒的可能，慢病毒载体技术已经可以在生物安全等级很低的实验室中正常使用。

慢病毒载体的前病毒序列一旦整合进入宿主细胞基因组中后，就不在进行复制和再次表达病毒颗粒，即使该细胞后来再次被野生型慢病毒感染也不会发生重组复性的现象。此外，随着LTR序列的部分敲除，病毒整合可能导致癌征发生的几率也被彻底消除。使用SIN载体的第三个好处就是，因为表达重组蛋日的启动子是人为选择的，那么也就可以通过控制启动子的特异性，实现在被感染的宿王细胞中里组蛋白的特异性表达。现在一般认为，在其他条件完全相同的情况下，使用SIN载体得的慢病毒比使用非SIN裁体获得的慢病毒滴度高10倍左右。

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