【摘要】 现阶段,细胞质微管与运动蛋白、动力蛋白等运动分子的相互作用主要通过光学显微镜进行研究。
现阶段,细胞质微管与运动蛋白、动力蛋白等运动分子的相互作用主要通过光学显微镜进行研究。微管在玻璃表面的滑动已经用视频增强的差示干涉对比(DIC)光学显微镜进行了广泛的研究。光学显微镜方法是观察运动活动的理想方法,但最终,为了根据其结构识别特定类别的物体,还必须要求助于电子显微镜。在这种情况下,负染色法是迄今为止最方便的标本制备和可视化方法。同时,负染技术也使得在电子显微镜水平上对相同样品的亚结构进行研究成为可能。
在这种类型的早期研究中,科研工作者使用DIC光学显镜观察到细丝积极参与运动后,再使用负染色法确定它们是单独的微管。最近,Linda在共聚焦扫描光学显微镜上通过反射干涉研究了滑动微管,并发现了在滑动过程中弯曲的微管可以无限期地保持弯曲状态的证据。
激动素和动力蛋白的制备方法与其他方法相同,重组的大脑微管需使用20 μm紫杉醇提取的盐以稳定去除MAP。 在EM和光学显微镜的联合研究中,将1%的硝化纤维素乙酸戊酯溶液滴在水面上。形成的薄膜被放置到玻璃盖板的上表面,薄膜和玻璃盖板的中间支撑着几个铜电磁场栅格,这样放置的目的是将栅格困在薄膜和玻璃之间。动蛋白和微管混合在盖片上,然后倒置到玻片上。在光学显微镜下记录到微管滑动后,将盖玻片从载玻片上取下,在洗涤缓冲液中短暂浸泡,并用1%UAc水溶液负染色。
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