【摘要】 蛋白沉淀RP-HPLC测定血清及唾液中氨苯飙及其代谢物

氨苯矾(Dapsone，DDS)口服吸收迅速而完全，蛋白结合率为50%~90%。在体内约50%经乙酰化代谢生成单乙酰化物(MADDS)，70%~80%以原型和代谢物（葡萄糖醛酸苷和硫酸酯经尿排出。因氨苯矾在体内乙酰化代谢率高，且在人群中有快、慢型之分，故而在体内分析时均同时分离检测其单乙酰化代谢物。

氨苯矾易溶于丙酮，略溶于乙醇，极微溶于水，在酸液中溶解﹔遇光能变色。氨苯矾HPLC测定，通常采用RP-HPLC。生物样品预处理可在碱性下用二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、二氯乙烷-正丁醇醋酸酯提取，回收率在95%以上，最低检出浓度可达10ng/ml 以下。使用叔丁基甲基醚提取，亦具有较高检出灵敏度，取样量仅需0.15ml;而使用高氯酸沉淀蛋白后，取上清液直接进样，操作简便，回收率约90%。另有人采用低压连续流动与柱切换HPLC连用在线浓缩技术分析了肉、蛋及牛奶等食品中氨苯矾及磺胺类药物的残留量,回收率在85%以上，最低检出浓度为5~ 20pug/kg。氨苯矾大多采用紫外检测。荧光检测的最低检出浓度为5ng/ml"")，而采用电化学检测时，最低检出浓度可达0.2ng/mL.

 

1.蛋白沉淀RP-HPLC测定血清及唾液中氨苯飙及其代谢物

(1）色谱条件色谱柱:Spherisob S5 ODS-1柱(25cm×4.6mm，5um)。保护柱:Spherisob S5 ODS-1柱(1cm×4.6mm)。流动相:紫外检测，乙腈-0.05mol/L.磷酸二氢铵溶液(pH4.6)(12∶ 88);电化学检测，乙腈-甲醇-0.05mol/L磷酸二氢铵溶液(pH4.6)(9: 4 ∶87)。流速:2ml/min。柱温:40℃。检测:紫外，295nm;电化学:工作电位，电极1.0.5V;电极2.0.7V。

(2)样品测定﹐血样:取血清200ul，加内标溶液（100pg/ml或5ug/ml Diazoxide或Practolol)100pl、0. 05mol/L磷酸二氢铵溶液(pH4.6) 100ul、20%高氯酸50ul，涡旋混合，离心5min，取上清液250pul进样。保留时间:氨苯飙，6.8min(电化学检测,7min);内标物，8.5min(电化学检测，11min);单乙酰氨苯矾(MADDS)，12min。

唾液:取唾液，离心4min，取上清液100pl，加水150pul、内标溶液（5ug/ml)100pl,涡旋混合，取250pl进样。

(3）线性范围和检测限检测限:25ng/ml(紫外检测); 200pg/ml(电化学检测)。

(4）说明紫外检测在220nm有较强吸收，但干扰严重，故选择在295nm。内标物Diazoxide用于紫外检测;Practolol 用于电化学检测。

 

【1】张祥民. 现代色谱分析[M]. 复旦大学出版社, 2004.

【2】傅若农, 顾峻岭. 近代色谱分析[M]. 国防工业出版社, 1998.

【3】刘克玲. 实用仪器分析[J]. 国外科技新书评介, 2014(8):1.

【4】李发美. 医药高效液相色谱技术[M]. 人民卫生出版社, 2000.

【5】严拯宇. 中药薄层色谱分析技术与应用[J]. 中国医药科技出版社, 2009.