【摘要】 然而，流式细胞仪将测试样品分成通过检测区域的单个液滴。虽然每个液滴包含一个细胞，但检测到的信号是整个液滴的荧光强度，无法准确检测精子的荧光强度。

近年来，不孕症的发病率逐年增加。根据WHO的统计，不孕症影响了8%-12%的育龄夫妇，其中50%与男性因素有关。男性不育症的发生和发展与多种因素有关，包括生活方式的改变、遗传原因以及活性氧ROS引起的身体损伤。ROS引起的精子损伤是男性不育的主要原因之一。ROS是指一类在人体或自然环境中具有高氧化能力的含氧物质，包括超氧阴离子、过氧化氢、羟基和过氧基。ROS对精子过度损伤的机制包括两个方面：（1）ROS直接破坏细胞核和线粒体中的精子DNA;（2）ROS导致精子细胞膜脂质过氧化，引发轴突损伤，导致精子ATP缺乏，最终影响精子活力。综上所述，精子中过量的ROS对男性不育有重要影响;因此，精子中ROS水平是男性不育症诊断和治疗的重要指标。

目前，检测精子中ROS的主要方法是化学发光（CL）测定和流式细胞术（FCM）[1]。CL测定使用鲁米诺作为发光剂;鲁米诺被ROS氧化以发出光信号，然后由CL计检测以反映精子中的ROS水平。然而，通过这种方法检测到的ROS是精子和精浆ROS水平的总和。精浆ROS水平受周围环境影响较大;因此，这种方法不能准确反映精子ROS水平。重要的是，精子中的ROS水平，而不是精液中的ROS水平，是最能反映精子质量和男性生育能力的指标。为了克服CL测定不能直接检测精子ROS的困难，研究人员采用FCM来检测精子ROS。ROS的FCM检测原理是激发荧光探针（如2′，7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯，DCFH-DA），然后收集信号。探针本身不发出荧光信号，可以自由穿过细胞膜。但是，探针进入精子并被ROS氧化后，它不能再穿透精子。然后精子中的探针被激光激发，并发出荧光信号。该检测方法可以对精子细胞中的ROS产生特异性反应。然而，流式细胞仪将测试样品分成通过检测区域的单个液滴。虽然每个液滴包含一个细胞，但检测到的信号是整个液滴的荧光强度，无法准确检测精子的荧光强度。此外，流式细胞仪的激发光聚焦在特定平面上。对于不同的精子，即使它们具有相同的ROS水平（细胞中荧光物质的浓度），它们也会因为焦平面的差异而显示出不同的检测结果。因此，FCM无法准确测量精子的细胞内荧光信号。综上所述，ROS水平的评价对评价精子质量，对男性不育症的预后评估、教育诊断和抗氧化治疗具有重要的指导意义。

  • Mahfouz R , Sharma R , Lackner J ,et al.Evaluation of chemiluminescence and flow cytometry as tools in assessing production of hydrogen peroxide and superoxide anion in human spermatozoa[J].Fertility & Sterility, 2009, 92(2):819-827.

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