【摘要】 基于一系列氧化还原反应，电子沿着电子传输链流动，释放能量，使 H+ 离子穿过线粒体内膜。

有氧呼吸是真核细胞能量的主要来源[1]。在这种情况下，线粒体呼吸链产生的 ATP 依赖于 NADH 和 FADH2 的可用性来提供质子和电子[2]。基于一系列氧化还原反应，电子沿着电子传输链流动，释放能量，使 H+ 离子穿过线粒体内膜。由此产生的质子动力用于驱动 ATP 合成，而流过呼吸链的电子的最终受体是分子氧。该过程的一个副作用是产生活性氧（ROS）。虽然线粒体 ROS (mtROS) 的产生与许多病理状况（即衰老和肿瘤发生）有关，但最近的证据表明，包括恶性细胞在内的多种细胞利用这些能量产生的副产品作为控制各种细胞过程的信号。在这里，描述了使用化学探针通过流式细胞术和荧光分光光度法测量完整细胞中 mtROS 产生的协议。ROS 在细胞生理学中发挥着重要作用，并参与许多病理过程。线粒体是细胞 ROS 产生的重要来源。在这里，我们介绍使用流式细胞术和荧光分光光度计读板仪检测几种细胞类型中线粒体特异性 ROS 产生的技术。通过选择不同的 ROS 检测探针，可以检测总细胞 ROS 或线粒体特异性 ROS。这些技术使研究人员能够在数小时（使用荧光分光光度计读板器）或数天内（使用流式细胞仪）监测基础 ROS 水平以及动态 ROS 产生。除了检测长期治疗期间动态 ROS 产生外，这些流式细胞术方法还可以通过与细胞表面标记物共染色来测量大多数特定类型以及不同条件下的细胞或异质细胞群中的 ROS。

1.Aggarwal, A., Misro, M. M., Maheshwari, A., Sehgal, N., & Nandan, D. (2010).N-acetylcysteine counteracts oxidative stress and prevents hCG-induced apoptosis in rat Leydig cells through down regulation of caspase-8 and JNK. Molecular Reproduction and Development, 77, 900–909.

2.Baixauli, F., Martin-Cofreces, N. B., Morlino, G., Carrasco, Y. R., Calabia-Linares, C.,Veiga, E., et al. (2011). The mitochondrial fission factor dynamin-related protein 1 modulates T-cell receptor signalling at the immune synapse. The EMBO Journal, 30, 1238–1250.

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