【摘要】 脊索瘤是由脊索残余引起的轴骨恶性肿瘤。脊索是一种重要的胚胎结构，参与神经系统和轴骨架的发育。

脊索瘤是由脊索残余引起的轴骨恶性肿瘤。脊索是一种重要的胚胎结构，参与神经系统和轴骨架的发育。因此，脊索瘤分子生物学研究中，脊索似乎是最合适的控制组织。然而，到目前为止，由于难以分离脊索组织，主要是不同的组织而不是脊索被用作脊索瘤的对照。R.G.C. Santegoeds Y 等人[1]提出了了一种快速而精确的分离脊索细胞的方法。使用（免疫）组织化学方法对妊娠9、11和13周的人类胎儿进行检查。为了分离纯脊索细胞用于进一步的分子生物学研究，用切片机解剖了5个妊娠9至10周的快速冷冻胎儿。此后，通过使用激光捕获微滴收获用于进一步分子生物学研究的纯脊索细胞。通过测量胎儿冠臀长度来估计胎龄。组织保存于-80°C。将脊柱碎片固定在Tissue Tek FSC22中。在低温恒温器上切割胎儿脊柱的矢状14µm切片，将其安装在普通载玻片上，并用甲苯胺蓝（TB）染色，以确定切片的位置并检查脊索簇。起初，安装了10个切片并用TB染色。接下来的十个切片安装在不含RNase的玻璃PEN膜载玻片上，其适用于激光捕获显微切割（LCM）。随后，将一个切片安装在普通载玻片上，并用TB染色。如果仍然可见脊索簇，则将接下来的十个切片安装在一个不含RNase的PEN玻璃载玻片上。再次，将一个切片切割并安装在普通载玻片上，并用TB染色。这种情况一直持续到看不到更多的脊索簇为止。含有脊索切片的无RNase玻璃PEN膜载玻片始终保持在-20°c下，并在-80°c下保存最多4周，直到LCM。在这些切片上，可以看到脊椎和椎间盘。当接近脊椎中心时，每次都要做两个切片并用TB染色，直到可以看到脊索。这项研究说明了胚胎棘的脊索在妊娠的三个不同阶段（9-11-13周）。短支免疫组化染色显示脊索染色强，椎间盘和椎体染色弱。脊索切片的LCM和随后的总RNA提取导致总RNA的良好产量。对两个持家基因的qPCR分析证实了RNA的质量。

[1] Yakkioui Y , Santegoeds R , Overbeeke K V ,et al.Isolating Human Notochord Using Laser Capture Microdissection[J].Journal of Neurological Surgery, Part B: Skull Base, 77:-[2023-06-23].DOI:10.1055/s-0036-1592550.

 

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