生物实验常用缓冲液配方指南

为了助力科学研究工作者的实验，我们为科研者整理了在分子生物学、蛋白质生物学、微生物学等方面实验室基础科研常用的缓冲液配方，方便进行查阅和使用。

1、DNA电泳缓冲液：

（1）琼脂糖电泳TAE缓冲液：

① 50×TAE贮存液：使用分析天平称量Tris-base 242 g/L，EDTA·Na₂·2H₂O 37.2 g/L，使用量筒称量冰乙酸57.1 mL，加入ddH₂O进行定容，室温保存以备使用，使用时稀释为1×。

② 1×TAE工作液：使用分析天平称量Tris-base 242g和EDTA·Na₂·2H₂O  37.2g于1L烧杯中。向烧杯中加入约800 mL ddH₂O，充分搅拌溶解。使用量筒称量冰乙酸57.1 mL，用NaOH调pH至8.3，加ddH₂O将溶液定容至1L，室温保存。

（2）Tris-硼酸（TBE）缓冲液：

① 5×TBE贮存液：称量54g Tris-base、27.5g硼酸，以及20 mL 0.5mol/L EDTA，然后加入ddH₂O溶解混匀，用NaOH调pH至8.0，溶液体积定为1L。

② 0.5×TBE工作液：使用5×进行稀释。

（3）Tris-磷酸（TPE）缓冲液：

① 10×TPE贮存液：称量108g Tris-base，使用量筒称量15.5mL 85%磷酸，以及40 mL 0.5mol/L EDTA，加入ddH₂O溶解混匀，用NaOH调pH至8.0，溶液体积定为1L。

② 1×TPE工作液：使用10×进行稀释。

2、蛋白质电泳相关试剂：

（1）SDS-PAGE电泳缓冲液(10×储存液)：使用分析天平称量24.22 g/L Tris-base，188 g/L 甘氨酸以及10 g/L SDS，用磁力搅拌器进行搅拌，可适当加热至约40℃加速溶解，溶解后室温保存。

（2）1×Tris-甘氨酸电泳液(电泳缓冲液工作浓度)：将所配制的SDS-PAGE电泳缓冲液(10×储存液)使用ddH₂O进行1:10比例稀释 (100 mL 10×储存液 + 900 mL ddH₂O)，获得工作浓度的电泳缓冲液1×Tris-甘氨酸电泳液，室温保存。

（3）30%丙烯酰胺：在穿戴好实验服、口罩、手套情况下，避光称取290 g/L的丙烯酰胺以及10 g/L的 N,N-甲叉双丙烯酰胺，用ddH₂O进行定容，在避光情况下使用磁力搅拌器进行溶解，并通过0.45 μm口径过滤膜进行过滤，避光4℃保存。

（4）分离胶缓冲液Tris-HCl (1.5 mol/L pH 8.8)：使用分析天平称取181.71 g/L Tris-base，用ddH₂O进行定容并溶解，用HCl调节pH至8.8，在4℃冰箱保存。

（5）浓缩胶缓冲液Tris-HCl (1.0 mol/L pH 6.8)：使用分析天平称取121.14 g/L Tris-base，用ddH₂O进行定容并溶解，用HCl调节pH至6.8，在4℃冰箱保存。

（6）SDS-PAGE上样缓冲液 (5×)：25 mL 1M Tris-HCl（pH 6.8），10g SDS，0.5g溴酚蓝，50 mL甘油，然后定容至100 mL。分装后，每支4 mL，4℃保存。使用时，每4 mL加入200 ul的β-巯基乙醇，长期保存至于-20℃，短期使用至于4℃，使用时通过ddH₂O进行溶解稀释为2×、1×等所需其他使用浓度，并保存方式相同。

（7）10% APS：取8 mL ddH₂O，加入1 g过硫酸铵溶解后，定容至10 mL。过滤除菌，长期保存至于-20℃冰箱，短期使用至于4℃，避光保存。

（8）10% SDS：使用分析天平称取5 g SDS，在ddH₂O中进行溶解，并定量至50 mL。

3、蛋白质电泳染色及脱色试剂

（1）染色液：每1 L溶液用甲醇450 mL，冰乙酸100 mL，用ddH₂O定容进行配制，并加入2.5 g 考马斯亮蓝G250。

（2）脱色液：每1 L溶液用甲醇450 mL，冰乙酸100 mL，用ddH₂O定容进行配制。

4、蛋白质纯化相关试剂

（1）超声破菌缓冲液：20 mmol/L Tris-HCl pH8.0、0.5 mol/L NaCl、1 mmol/L EDTA、1 mg/mL溶菌酶。

（2）包涵体洗涤缓冲液：50 mmol/L Tris-HCl, 1 mmol/L EDTA, 50 mmol/L NaCl, 0.5% Triton X-100, pH 8.0。在使用时，将包涵体加入此溶液中，37℃振荡洗涤1～2 h，然后8000 r/min 离心15 min，收集沉淀。

（3）包涵体溶解缓冲液：20 mmol/L Tris-HCl pH 8.0，0.5 mol/L NaCl，8 mol/L尿素，0.2 mmol/L DTT或100 mmol/L β-巯基乙醇，2% Triton X-100。

（4）Ni²⁺亲和层析柱纯化缓冲液：结合液(binding-buffer)：用分析天平称取药品用ddH₂O进行定容，体积定为1 L，药品在溶液中浓度为：Tris-base 20 mmol、NaCl 30 mmol、咪唑10 mmol，用HCl和NaOH调节pH至7.8。

洗脱缓冲液：结合液配方咪唑改为30-60 mmol，调节pH至7.8。

收集缓冲液：结合液配方咪唑改为250 mmol。

• pH缓冲液的配制：

（1）PBS试剂配制：用分析天平称取药品用ddH₂O定容体积为1L（pH 7.4），药品在溶液中浓度为：137 mM NaCl、2.7 mM KCl、10 mM Na₂HPO₄和2 mM KH₂PO₄，用0.45 μm口径滤膜过滤后，在121℃灭菌锅中灭菌后放冷备用，4℃放于冰箱保存。

（2）0.01mol/L PBS(磷酸盐缓冲液Phosphate Buffer Saline，PBS)，pH7.2：

A：0.2mol/L磷酸氢二钠液(A液)：NaH₂PO₄·12H₂O 35.814g，用ddH₂O定容至500 mL。

B：0.2mol/L磷酸二氢钠液(B液)：NaH₂PO₄·2H₂O 15.601g，用ddH₂O定容至500 mL。

取A液36 mL，B液14 mL和NaCl 8.2 g，ddH₂O定容至1000 mL。混匀待完全溶解分装，经高压灭菌后保存于4℃冰箱备用。

（3）1/15 mol/L PBS(磷酸盐缓冲液Phosphate Buffer Saline，PBS)：

A液：1/15 mol/L Na₂HPO₄溶液：Na₂HPO₄ 9.465g，ddH₂O定容至1000 mL。

B液：l/15 mol/L Na₂HPO₄溶液：Na₂HPO₄ 9.07g，ddH₂O定容至1000 mL。

分装在棕色瓶内，于4℃冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液，混合比例见下表:

（4）Tris缓冲盐溶液（TBS）：

用800 mL ddH₂O溶解8g NaCl，0.2g KCl和3g Tris-base，加入0.015g酚红并用HCl调pH值至7.4，用ddH₂O定容至1L。分装后在15 psi（1.05 kg/cm²）高压下蒸汽灭菌20 min，保存于室温。

（5）碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液：

贮备液A：0.2 mol/L碳酸钠（Na₂CO₃·H₂O 24.8g配成1000 mL）；

贮备液B：0.2 mol/L碳酸氢钠（NaHCO₃ 16.8g配成1000 mL）。

x mL A液 + y mL B液稀释至200 mL：

（6）磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液：

贮备液A：0.2 mol/L磷酸二氢钠（NaH₂PO₄·H₂O 27.6g或NaH₂PO₄·2H₂O 31.21g配成1000 mL）；

贮备液B：0.2 mol/L磷酸氢二钠（NaH₂PO₄·2H₂O  35.61g或NaH₂PO₄·12H₂O 71.64g配成1000 mL）。

x mL A液 + y mL B液稀释至100 mL：

（7）Tris-HCl缓冲液：

贮备液A：0.2 mol/L三羟甲氨基烷（Tris, C₄H₁₁NO₃，24.2g配成1000 mL）；

贮备液B：0.2 mol/L盐酸（浓HCl 17.1 mL配成1000 mL）。

50 mL A液 + x mL B液稀释至200 mL：

（8）柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液：

贮备液A：0.1 mol/L柠檬酸（C₆H₈O₇，19.21g配成1000 mL）；

贮备液B：0.1 mol/L柠檬酸钠（C₆H₅O₇Na₃·2H₂O 29.41g配成1000 mL）。

x mL A液 + y mL B液稀释至100 mL：

（9）醋酸-醋酸钠缓冲液：

贮备液A：0.2 mol/L醋酸（冰醋酸11.55 mL稀释至1000 mL）；

贮备液B：0.2 mol/L醋酸钠（C₂H₂O₂Na 16.4 g或C₂H₂O₂Na·3H₂O 27g配成1000 mL）。

x mL A液 + y mL B液稀释至1000 mL：

• 细胞培养和细胞融合溶液：

1、0.25％胰蛋白酶-0.02％EDTA混合消化液：

先用少量0.01mol/L PBS溶解胰蛋白酶(Trypsin)粉0.25g，然后将20.0 mg EDTA粉末和剩下的液体定容至100 mL，置37℃水浴中1小时左右(待彻底溶解，液体呈透明为止)，抽滤，分装置4℃冰箱中保存。

2、Hanks液：

（1）原液

①原液A：NaCl 160g + KCl 8g + MgSO₄·7H₂O 2g + MgCl₂·6H₂O 2g溶于800 mL ddH₂O中。

CaCl₂(无水) 2.8 g溶于100 mL ddH₂O中。

将两种液体混合后，加水至1000 mL用滤纸滤过，再加2 mL氯仿防腐，置4℃冰箱备用。

②原液B：Na₂HPO₄·12H₂O 3.04 g + KH₂PO₄ 1.2g +葡萄糖20.0g

溶于800 mL ddH₂O中，用滤纸过滤，然后加0.5％酚红80 mL，再加水至1000 mL，最后加入2 mL氯仿防腐，置4℃冰箱备用。

（2）使用液

AB两液各1份，ddH₂O18份，混匀分装包扎好瓶口，经高压灭菌后置4℃冰箱中保存。使用时用5.6％NaHCO₃调pH值到所需要求。

3、LB培养基（Luria-Bertani培养基）：

（1）液体LB：在500 mL锥形瓶中配制LB液体培养基，用于菌体培养及蛋白诱导，使用分析天平称量药品：10 g/L胰蛋白胨，5 g/L酵母提取物，10 g/L NaCl，在锥形瓶中加入ddH₂O进行定容，在高压水浴锅中进行灭菌，程序121℃，15 min，并冷却至室温。

（2）固体LB：在锥形瓶中配制固体LB培养基用于菌体培养及划线、抗性筛选等。先用分析天平称量药品，包括10 g/L胰蛋白胨，5 g/L酵母提取物，10 g/L NaCl，以及 15 g/L琼脂粉，在高压水浴锅中进行灭菌，程序121℃，15 min，冷却至50℃左右后加入抗性进行混匀，以约25 mL/板的用量将尚未凝结的LB固体培养基倒在培养皿中，冷却至完全凝结。随后使用嫁接膜封口，倒置待用。

4、IPTG：isopropyl-β-D-thiogalactoside(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)，作为蛋白质诱导剂。母液1 M/L，工作液1 mM/L。

• 常用抗生素：

在实验室中进行微生物培养时，抗生素是常用的添加物，用于防止细菌污染或用于特定类型的菌种筛选。以下是一些常用抗生素的储存液浓度和使用浓度：

氨苄青霉素（Ampicillin）：Stock：100 mg/mL；Act：50 μg/mL

卡那霉素（Kanamycin Sulfate）：Stock：50 mg/mL；Act：50 μg/mL

庆大霉素（Gentamycin）：Stock：50 mg/mL；Act：50 μg/mL

利福平（Rifampicin）：Stock：50 mg/mL；Act：50 μg/mL

羧苄青霉素钠（Carbenicillin）：Stock：50 mg/mL；Act：50 μg/mL

氯霉素（Chloramphenicol）：Stock：34 mg/mL（溶于乙醇）；Act：25 μg/mL（严紧型质粒）至170 μg/mL（松弛型质粒）

链霉素（Streptomycin）：Stock：10 mg/mL；Act：10 μg/mL（严紧型质粒）

至50 μg/mL（松弛型质粒）

四环素（Tetracycline）：Stock：5 mg/mL（溶于乙醇)；Act：10 μg/mL（严紧型质粒）至50 μg/mL（松弛型质粒）

需要注意的是，抗生素的使用浓度可能会根据实验的具体需求和菌株的特性进行调整。此外，抗生素的储存条件通常为-20°C，并且应该使用不透光的容器保存，以防止光照引起的降解。在使用抗生素时，还应注意其溶解介质，例如氯霉素和四环素通常溶于乙醇，而其他一些抗生素如氨苄青霉素和卡那霉素则溶于水。

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