【摘要】 最近收到科研圈小伙伴的反馈,说自己在收到细胞死活染色实验结果后,反馈实验结果与细胞毒性结果对不上。

最近收到科研圈小伙伴的反馈,说自己在收到细胞死活染色实验结果后,反馈实验结果与细胞毒性结果对不上。这可把我吓得不轻,不禁怀疑是不是我们在实验过程中有哪些步骤做的不到位,但左思右想并没有什么发现。遂询问项目经理详细情况,原来是客户自行查询相关文献及说明书后认为实验结果图片中,绿色代表活细胞,红色代表死细胞,既然细胞毒性实验显示样品有细胞毒性,理应是图片中绿色减少,红色增多,但是对比两个实验结果,并不是这样。

 

 

了解缘由之后,我这边又仔细查找了相关资料,对这个问题进行以下解释:首先我们从细胞毒性检测的原理说起,细胞毒性实验又可以被称为细胞活性检测实验,常见的检测方法有MTT法和CCK-8法。

其中MTT的检测原理是活细胞中的线粒体中的琥珀酸脱氢酶将外源性MTT还原成水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,用DMSO溶解甲臜,通过比色法间接反应活细胞数量;CCK-8法与之类似,CCK-8试剂中的WST-8可以被线粒体中的脱氢酶还原成水溶性的黄色甲臜,通过比色法反应活细胞数量。看了这两种检测方法的原理,有什么感想?是不是觉得很类似?没错,这两种方法都是通过检测线粒体代谢产物浓度间接反应细胞活性或者数量。

由于这两种方法都是通过检测线粒体代谢产物浓度来反映细胞的活性或者数量,而根据样品的作用类型,可将样品的影响分为3类:促进线粒体代谢、无影响、抑制线粒体代谢。

 

 

由于版面有限,我们下期继续进行介绍。

 

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