【摘要】 免疫分析的种类较多，根据分析原理不同可分为均相免疫分析和非均相免疫，均相免疫分析是指抗原抗体在同一介质中进行的免疫反应，不需要磁性微球等固相载体。

免疫分析的种类较多，根据分析原理不同可分为均相免疫分析和非均相免疫，均相免疫分析是指抗原抗体在同一介质中进行的免疫反应，不需要磁性微球等固相载体。根据免疫识别和信号输出方式的不同，又可以分为双抗体夹心法、直接免疫竞争法、间接法、捕获法等类型。

 

双抗体夹心法是目前最常见、应用最广泛的检测方法。双抗体夹心法用于检测大分子抗原，它是利用待测抗原上的两个抗原决定簇A和B分别与固相载体上的抗体A和标记抗体B结合，形成“抗体-A-待测抗原-标记抗体B”复合物，复合物的形成量与待测抗原含量成正比的原理。

 

它使用聚苯乙烯制成的酶标板，通过π-π键的引力和静电、疏水作用力将抗体吸附于板面；使用缓冲液清洗未吸附的抗体，再加入含有明胶或牛血清蛋白（BSA）的封闭液以封闭酶标板上未结合抗体的部分，达到抗体包被的目的（合成的抗体的质量是测试精确的关键，好的抗体既能特异性高效地结合抗原又不受待测样中其他生物大分子、蛋白质和无机盐等成分的影响）。然后将待测样加入酶标板中，在37°C环境下孵育1-2小时，让抗体与待测抗原进行特异性识别结合。清洗除去其他未结合的物质，加入带有辣根过氧化酶（Horseradish Peroxidase, HRP）标记的酶标二抗，用于和标准抗体结合，并加入显色剂显色。最后输出酶标信号通过计算机分析进行检测。抗原结合到抗体表面后需要有个信号输出的方式，比较直接的方式是再用酶、荧光或者放射性标记的抗体去识别已经吸附在酶标板上的抗原。二抗往往制造成本便宜，标记技术成熟，可以保证有稳定的信号输出。

 

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