【摘要】 实时荧光定量PCR是一种核酸定量技术，以DNA或者cDNA为模板进行扩增、并以荧光基团作为特异性探针对PCR产物进行跟踪，利用一种已经知道浓度的标准品绘制标准曲线，可以检测DNA或者RNA含量，可研究某个基因在经过特定处理后转录水平的变化情况

实时荧光定量PCR是一种核酸定量技术，以DNA或者cDNA为模板进行扩增、并以荧光基团作为特异性探针对PCR产物进行跟踪，利用一种已经知道浓度的标准品绘制标准曲线，可以检测DNA或者RNA含量，可研究某个基因在经过特定处理后转录水平的变化情况。该技术具有较高的灵敏度、较强的特异性以及操作简单等优势，在基因表达研究、食品安全、科学研究和临床疾病检测等领域已得到广泛应用，如生物学定量研究、转基因动植物检测、病原微生物或病毒含量检测、癌症检测以及药物反应个体差异的遗传基础检测、基因差异表达和基因分型等。

 

图1 PCR原理示意图

 

整个PCR反应过程包括荧光背景信号、荧光信号指数扩增和平台期三个阶段。PCR技术的原理如图1所示，向反应体系中加入荧光探针，PCR反应进行扩增产物增加，以一种寡核苷酸作为探针，两端分别标记报告荧光基团和淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；初始阶段, 探针与DNA任意一条单链进行结合，当PCR扩增时，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，此时荧光监测系统可检测到荧光信号，即PCR扩增产物指数与DNA模板数表现出线性关系。当使用荧光染料SYBR，时，原理是SYBR与双链DNA进行结合，当体系中的模板被扩增时，SYBR可以结合到新合成的双链上面，随着PCR的进行，结合的SYBR染料越来越多，被仪器检测到的荧光信号逐渐增强，以此来达到定量的目的。

 

在原理的相关介绍中，阐述了两类不同测试方法下的原理，更加具体的分类及其各自的特点将在下一期为大家介绍。

 

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