【摘要】 在网状内皮细胞中生成的胆红素区α可进入血液循环，在血浆内主要以胆红素-白蛋白结合形式存在和运输。

胆红素(Bilirubin)是血红素的降解产物。在网状内皮细胞中生成的胆红素区α可进入血液循环，在血浆内主要以胆红素-白蛋白结合形式存在和运输。被肝脏摄取进入肝细胞后，胆红素与一分子或两分子葡萄糖醛酸结合成酯型的(单或双-)β-葡萄糖醛酸苷，即结合型胆红素(Conjugated Bilirubin)。结合型胆红素的水溶性强，从胆汁排泄。而未结合胆红素的极性很弱,在生理pH条件下几乎不溶于水溶液。结合型与未结合型胆红素在临床诊断上有重要意义。

结合型和未结合型胆红素在450nm有最大吸收，因此最早用于临床检测的方法是比色法，此法只能测定胆红素总量。Van den Burgh法(凡登白法)及其后的改进方法以直接偶氮法测定结合型胆红素，而间接偶氮法测定总胆红素，二者之差即为未结合型胆红素。HPLC是分析生物样品中结合型和未结合型胆红素及它们的各种异构体的最有效方法。反相高效液相色谱法曾广泛用于胆汁的结合型和未结合型胆红素的分析。

第一个RP-HPLC方法以磷酸四丁基铵作为离子对试剂，此法能排除胡萝卜素的干扰。采用醋酸铵-二甲基亚矾-乙腈成功地分离了甲酯化后血浆中胆红素及其单-、双-甲酯的各种异构体。用邻氨基苯甲酸乙酯等与胆红素及其结合物反应生成相应的偶氮衍生物后也能用RP-HPLC进行分离。甲酯化方法的缺点是与白蛋白共价结合的胆红素会与血浆蛋白一起沉淀，因而影响胆红素测定的准确度，尤其是白蛋白结合胆红素比例大的肝胆疾病患者的血浆测定。因此有不少HPLC方法旨在同时准确测定这一组分及其它组分。固相萃取的方法用咖啡因-苯甲酸钠等将结合和未结合胆红素从血浆蛋白中释放出来，萃取在固相萃取剂上，而与白蛋白共价结合的胆红素则不能被释放，随蛋白一起进入洗涤液，收集这一馏分，再用标准偶氮法测定。

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