【摘要】 ATP的HPLC测定报道很多,多为离子交换色谱法和RP-HPLC,RP-HPLC 多用C18柱。

ATP的HPLC测定报道很多,多为离子交换色谱法和RP-HPLC,RP-HPLC 多用C18柱。由于ATP在紫外区有吸收故经常采用的检测方法为紫外或二级管阵列检测; 用紫外检测测定血小板聚集核苷或核苷酸释放可检测至0.6 pmol，在测定血液或组织液中少量ATP时，经衍生化后用荧光检测，检出量可至0.1 pmol，衍生化试剂有氯乙醛等。流动相系统多采用磷酸盐缓冲液或离子对试剂溶液﹐当多组分混合时为达到短时间内完全分开的目的须用梯度洗脱。细胞中ATP的测定多采用高氯酸脱蛋白,经离心、中和、滤过后进样。

 

离子对RP-HPLC测定制剂中三磷酸腺苷钠(ATP-2Na)

 

(1) 色谱条件﹐色谱柱:u Bondapak Cia柱（3.9mm× 30cm，5um)。流动相:水(含0.005mol/L庚烷磺酸钠及0.02%冰醋酸）-甲醇(50 ∶50)。流速:1ml/min。检测:紫外，259nm。

 

(2) 样品测定﹐取ATP-2Na注射液制成10mg/ml 的溶液﹔取ATP-2Na片10片,精密称定，研细，精密称取适量，加水制成10 mg/ml的溶液，滤过，精密量取⒉.Oml，加入内标液(800pg/ml甲氧苄胺嗜啶水溶液)，稀释至10ml。取稀释液10pul进样。ATP-2Na片剂的色谱图见图10-1。保留时间:ATP，2. 2min;内标物，5min。

 

(3) 线性范围和检测限线性范围:80-400 ug/ml。检测限:8 pg/mol。

 

(4) 方法准确度和精密度﹐回收率:注射剂，99.8%(RSD 为1.02%，n=5);片剂，99.7%。(RSD 为100.0%，n=5)。

 

(5) 说明实验中部分样品与部颁标准的纸电泳法进行比较，两法无显著性差异。

 

【1】张祥民. 现代色谱分析[M]. 复旦大学出版社, 2004.

【2】傅若农, 顾峻岭. 近代色谱分析[M]. 国防工业出版社, 1998.

【3】刘克玲. 实用仪器分析[J]. 国外科技新书评介, 2014(8):1.

【4】李发美. 医药高效液相色谱技术[M]. 人民卫生出版社, 2000.

【5】严拯宇. 中药薄层色谱分析技术与应用[J]. 中国医药科技出版社, 2009.

 

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