【摘要】 血浆中的儿茶酚胺和它们的前体及代谢产物的测定对于许多疾病的诊断都有重要意义，如帕金森病、心脏病、神经脊瘤和甲亢或甲低症等。

血浆中的儿茶酚胺和它们的前体及代谢产物的测定对于许多疾病的诊断都有重要意义，如帕金森病、心脏病、神经脊瘤和甲亢或甲低症等。血浆样品处理的早期方法是氧化铝吸附法”，但此法的选择性差，如果使用阳离子交换和二苯基硼酸盐的两步提取法，能大大减少在离子对RP-HPLC上的干扰组分.阳离子交换法还可能得到两个馏分,用于分别测定其中的生物胺和酸、醇化合物。离子对RP-HPLC是测定血浆样品应用最多的分离方法，具有高灵敏度的电化学和荧光衍生化是其主要检测方法。

1.柱后衍生化离子对RP-HPLC测定血浆中儿茶酚胺及其相关物质

(1) 色谱条件﹑色谱柱:TSK gel ODS-80TM柱(25cm×4. 6mm，5pum)。流动相:30mmol/L柠檬酸盐缓冲液（含有0.4mmol/L辛烷磺酸钠，pH2.5)-甲醇(93∶ 7)。检测:荧光(根据化合物调节波长)。柱后衍生化:衍生化试剂,10mmol/L高碘酸盐、3mmol/L铁氰化钾和70%乙醇溶液(含有30mmol/L1,2-二苯基乙二胺和0. 13mol/L甲醇钠);衍生化试剂直接引入至色谱柱后洗脱液中。

(2) 样品测定取血浆0.7ml，加入异丙肾上腺素溶液(700nmol/L，内标物1)30pl和3，4-二羟基苯丙酸溶液(71umol/L，内标物2)50pul，再加入高氯酸350ul，混合后在4℃离心 15min，取上清液0.7ml，加入碳酸钾溶液（2.Omol/L)约150ul，调节pH1.5~2.0，混合并在4℃离心5min。取阳离子固相萃取柱(Toyopak IC-SPs，H*磺丙基树脂)，用水10ml洗后再用磷酸盐缓冲液(2.0mol/L，pH5.0)2ml平衡。将上述离心上清液0.6ml注入平衡好的固相萃取柱，收集流出液作为“酸-醇”组分的供试液。

(3) 方法准确度和精密度︰回收率(RSD<2.5%，n=-5):L-多巴，62%﹔内标物2，65%; HVA，80%;MOPEG，96%﹔其余为95%~99%。RSD (n-5):NE，3.2%;E，4.5%;L-多巴，6.7%;NMN，3.8%;DOPAC，6.5%;HVA，5.0%;MOPEG,7.3%。

(4)线性范围和检测限线性范围:VMA和MOPEG,10~3000pmol;L-多巴，2～1000pmol;其余，0.2~200pmol。检测限（S/N=3)，NE，0.5pmol/ml;E，0.7pmol/ml: DA，3prmol/ml: L-多巴，9pmol/ml，NMN，0.6pmol/ml;MN，1.5pmol/ml;3-MT，3pmol/ml;DOPAC，4pmol/ml，HVA，4pmol/ml;MOPEG，90pmol/ml。

(5）说明此法也能用于尿样的测定，只是样品处理稍有不同。与电化学氧化相比,高碘酸不氧化О-硫酸结合儿茶酚胺,只有游离儿茶酚胺及其相关物质才被氧化并与DPE发生荧光衍生化反应，因此色谱干扰峰少，提高了方法的灵敏度和选择性。

【1】张祥民. 现代色谱分析[M]. 复旦大学出版社, 2004.

【2】傅若农, 顾峻岭. 近代色谱分析[M]. 国防工业出版社, 1998.

【3】刘克玲. 实用仪器分析[J]. 国外科技新书评介, 2014(8):1.

【4】李发美. 医药高效液相色谱技术[M]. 人民卫生出版社, 2000.

【5】严拯宇. 中药薄层色谱分析技术与应用[J]. 中国医药科技出版社, 2009.

 

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