【摘要】 随着人们对慢病毒载体的认识从一种基因敲入工具转变为一种有效的基因治疗工具，对于包装慢病毒载体所使用的工程细胞系的研究也在如火如荼地进行中。

随着人们对慢病毒载体的认识从一种基因敲入工具转变为一种有效的基因治疗工具，对于包装慢病毒载体所使用的工程细胞系的研究也在如火如荼地进行中。慢病毒包装过程中反复而繁琐的质粒转染过程促使科学家们一直希望开发出一种能长期稳定地表达病毒的宿主细胞系，对于细胞系的研究的早期经验都是来源于逆转录病毒载体。对于这种细胞系的要求主要是表达复制缺陷型病毒组分的效率以及细胞本身的转染效率必须足够高。

 

最早的包装病毒专用的工程细胞系是由Corbeau在1996年建立完成的。他们将敲除了包装信号的HIV基因组cDNA整合到Hela细胞系中，构建了一种崭新的细胞系。这种细胞系可以表达产生非感染性的HIV病毒颗粒而且自身RT酶仍然具有正常功能。在生产慢病毒时，只需要转染表达含有Gag、RRE和药筛基因gpt的质粒就能在培养基上清中收集慢病毒颗粒，且这种慢病毒具有很好的转染CD4阳性细胞的能力。

 

VSVG蛋白包膜的使用在扩大病毒载体宿主来源的同时，也对于工程细胞系的设计提出了新的要求。Kafri设计了一种细胞系，将VSVG蛋白与GFP连接后，由双向作用的四环素基因诱导表达。生产病毒所需要的其他蛋白组分也被单独整合到细胞基因组中，由一套相似的诱导系统来诱导表达。这种方法能获得10TU/mL的慢病毒载体，且在体内和体外实验中均能有效发挥作用。整合病毒的生产过程仅需要3-4天，而且病毒工程细胞系建立好以后可以长期使用，长期高效的生产慢病毒载体。

 

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