【摘要】 RP-HPLC测定注射剂中氟康唑

1.RP-HPLC测定注射剂中氟康唑

(1)色谱条件色谱柱:u-Bondapak C,s柱(30cm×3.9mm,5um)。流动相:甲醇-水(50 : 50)。流速:0.8ml/min。检测:紫外,261nm。

(2)样品测定精密量取氟康唑注射液适量(约相当于氟康唑10mg〉置100ml量瓶中,加入内标溶液(O.2mg/ml对氨基苯甲酸流动相溶液)2ml,用流动相稀释至刻度﹐摇匀,取20pul进样。

(3)方法准确度和精密度回收率:100.0%(RSD为0.7%,n=5)。

(4)线性范围和检测限线性范围:20~200ug/ml。检测限:5.0ug/ml。

(5)说明流动相中甲醇浓度在40%~60%较为理想。低于40%时,氟康唑的保留时间较长,峰形变差;高于60%时,氟康唑与内标物分离度下降。

 

2.溶剂提取RP-HPLC测定血浆和唾液中氟康唑

(1)色谱条件色谱柱:LiChrosorb RP-18柱(12.5cm × 4mm,5um)。保护柱;LiChrospher 100RP-8柱(O.4cm× 4mm,5um)。流动相:0.01mol/L醋酸钠缓冲液(盐酸调节pH5.0)-甲醇(70 ∶30)。流速:1. oml/min。检测:紫外,261nm。

(2)样品测定﹐取血样置肝素抗凝试管中,立即离心,分取血浆,并随之于60℃培育30min,使 HIV失活后,于-30℃贮存;唾液离心分离后,于-30℃贮存。

血样:取血浆500ul,加内标溶液(20pg/ml非那西丁甲醇溶液)100pl,涡旋混合10s,加5mol/L氢氧化钠溶液50ul,涡旋混合10s,加氯仿-异丙醇(4∶1)5.00ml,振摇15min,离心15min,取有机相于另一试管中,于50℃氮气流吹干,残渣加甲醇60pul,涡旋溶解30s,并移置聚丙烯离心管中,加0.01mol/L醋酸钠缓冲液(pH5.0)140pul,涡旋混合30s,离心5min,取上清液100ul进样。保留时间:氟康唑,8min;内标物,12min。

唾液:预处理方法同于血浆,但取样量为250ul;不加内标溶液﹔准确移取4.0ml 的提取液于另一聚乙烯离心管中。

(3)方法准确度和精密度回收率:血浆,93.2%~98.4% (0.5一50pg/ml);唾液,97.8%~107.8%(5~75ug/ml)。日内RSD:血浆,2.0%~7.1%(n=9);唾液,3.3%~10.8%(n=6)。日间RSD:血浆,1.3%~15.0%(n=9);唾液,3.3%~10.8%(n—6)。

(4)线性范围和检测限线性范围:0.1~100pg/ml。定量限(RSD为20%):0. 1ug/ml(血浆); 1ug/ml(唾液)。

(5)说明使用醋酸乙酯或正丁醇提取时,回收率接近100%,但干扰较大﹔而氯仿-异丙醇(4∶1)对氟康唑和内标物的提取率接近90%,并可重现且所得色谱较“干净”。唾液中,氟康唑可有效提取,但内标物的提取率不够稳定,RSD 为21%(n=10),因而不宜使用内标法,故提取液需准确移取。

 

【1】张祥民. 现代色谱分析[M]. 复旦大学出版社, 2004.

【2】傅若农, 顾峻岭. 近代色谱分析[M]. 国防工业出版社, 1998.

【3】刘克玲. 实用仪器分析[J]. 国外科技新书评介, 2014(8):1.

【4】李发美. 医药高效液相色谱技术[M]. 人民卫生出版社, 2000.

【5】严拯宇. 中药薄层色谱分析技术与应用[J]. 中国医药科技出版社, 2009.