【摘要】 溶剂提取RP-HPLC测定血浆和唾液中氟康唑

2.溶剂提取RP-HPLC测定血浆和唾液中氟康唑

(1)色谱条件色谱柱:LiChrosorb RP-18柱(12.5cm × 4mm,5um)。保护柱:LiChrospher 100RP-8柱(O.4cm× 4mm,5um)。流动相:0.01mol/L醋酸钠缓冲液(盐酸调节pH5.0)-甲醇(70 ∶ 30)。流速:1.Oml/min。检测:紫外,261nm。

(2)样品测定取血样置肝素抗凝试管中,立即离心,分取血浆,并随之于60℃培育30min,使 HIV失活后,于-30℃贮存;唾液离心分离后,于-30℃贮存。

血样:取血浆500pul,加内标溶液(20ug/ml 非那西丁甲醇洛液)100pl,涡旋混合10s,加5mol/L氢氧化钠溶液50pul,涡旋混合10s,加氯仿-异丙醇(4∶1)5.00ml,振摇15min,离心15min,取有机相于另一试管中,于50℃氮气流吹干,残渣加甲醇60pul,涡旋溶解30s,并移置聚丙烯离心管中,加0.01mol/L醋酸钠缓冲液(pH5.0)140pl,涡旋混合30s,离心5min,取上清液100ul进样。保留时间:氟康唑,8min;内标物,12min。

唾液:预处理方法同于血浆,但取样量为250pul;不加内标溶液﹔准确移取4.Oml的提取液于另一聚乙烯离心管中。

(3)方法准确度和精密度回收率:血浆,93.2%~~98.4%(0.5~50ug/ml);唾液,97.8%~107.8%(5~75ug/ml)。日内RSD:血浆,2.0%~7.1%(n=9)z唾液,3.3%~10.8%(n=6)。日间RSD:血浆,1.3%~15.0%(n=9);唾液,3.3%~10.8% (n =6)。

(4)线性范围和检测限线性范围:0.1~100ug/ml。定量限(RSD 为20%):0. 1ug/ml(血浆); 1ug/ml(唾液)。

(5)说明使用醋酸乙酯或正丁醇提取时,回收率接近100%,但干扰较大﹔而氯仿-异丙醇(4∶1)对氟康唑和内标物的提取率接近90%,并可重现且所得色谱较“干净”。唾液中,氟康唑可有效提取,但内标物的提取率不够稳定,RSD为21%(n=10),因而不宜使用内标法,故提取液需准确移取。

 

【1】张祥民. 现代色谱分析[M]. 复旦大学出版社, 2004.

【2】傅若农, 顾峻岭. 近代色谱分析[M]. 国防工业出版社, 1998.

【3】刘克玲. 实用仪器分析[J]. 国外科技新书评介, 2014(8):1.

【4】李发美. 医药高效液相色谱技术[M]. 人民卫生出版社, 2000.

【5】严拯宇. 中药薄层色谱分析技术与应用[J]. 中国医药科技出版社, 2009.