【摘要】 随着冷冻电子显微镜的兴趣的强烈增加，负染色的方法也经历了复苏。许多人将其用作冷冻EM样品制备的质量控制步骤，冷冻EM设施在申请成像时间时通常将其作为先决条件，阴性染色本身也可以揭示有用的信息。

随着冷冻电子显微镜的兴趣的强烈增加，负染色的方法也经历了复苏。许多人将其用作冷冻EM样品制备的质量控制步骤，冷冻EM设施在申请成像时间时通常将其作为先决条件，阴性染色本身也可以揭示有用的信息。与冷冻EM相比，负染色简单、快速，不需要任何特殊仪器，并且甚至可以在较低水平TEM上成像。所有制备步骤和成像均在室温下进行。

对于蛋白质，负染色已经很好地建立，并且大多数时间蛋白质和蛋白质复合物保持在接近天然状态的状态。不幸的是，对于脂质体和其他脂质制剂，情况并不总是如此，它们在负染色中更容易受到伪影的影响。脂质体负染色的结果应仔细解释，特别是意外发现应与其他方法交叉检查，例如冷冻EM。通常需要优化染色方案以适应不同的脂质体制剂。一旦制备方法已经针对特定脂质体制剂进行了验证，其可用于检查浓度、尺寸分布和形态学的类似制剂。

脂质体负染色TEM的主要问题是这些在过程中可能改变形态。这是由于脂质与碳表面的相互作用和/或染色和风干期间离子强度和渗透压的变化。脂质体可以改变其形状，在极端情况下完全失去完整性并扩散到碳膜上。在较高浓度下，这可能导致整个网格上连续的脂质膜，从而阻止任何有用的观察。通常，这些问题可以通过稀释脂质体制剂和/或改变标准负染色程序来解决，目的是减少脂质体与碳膜相互作用的时间并增加干燥速度。在本教程中，将介绍实现这一目标的负染色方案的几种变化。即使在脂质体保持完整的情况下，它们在干燥过程中也会在碳膜上变平，并且在溶液中看起来比原来的大。

  • Ulrich Baxa, Preparation of Liposomes for Negative Staining TEM, Microscopy and Microanalysis, Volume 26, Issue S2, 1 August 2020, Pages 2090–2091, https://doi.org/10.1017/S1431927620020401

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