负染色电镜观察鸭坦布苏病毒超微结构

负染色电镜观察鸭坦布苏病毒超微结构，鸭特姆布苏病毒（DTMUV）是黄病毒科的一种包膜单链正义RNA病毒，对家禽造成严重的经济损失。X. LUO等人^[1]的研究采用病毒纯化、阴性染色和电镜观察了DTMUV的超微结构。实验中使用了鸭特姆布苏病毒株CQW1（GenBank:KM233707.1）。用该病毒的悬浮液接种9天大的胚胎鸭蛋，在37℃下孵育3天。尿囊液离心后的上清液，在4℃下以100000 x g的速度超速离心3小时，制成颗粒，并重悬于磷酸盐缓冲盐水中。然后通过超速离心在30、45、60%的不连续蔗糖梯度上纯化悬浮液，然后用PBS稀释。最后，通过超速离心将纯化的病毒制成颗粒以除去蔗糖。将纯化的DTMUV应用于涂有碳的格栅，并用辉光放电，用20μl 3%磷钨酸染色5分钟，然后风干。用在100keV下操作的透射电子显微镜（TEM，JEOL JEM-100CX）观察样品。在电子显微镜图像中，个体鸭特姆布苏病毒粒子不形成簇，而是单独分散。它们表现为球形或细长颗粒。粒子看起来大多是球形的。其具有典型的黄病毒包膜超微结构，由E糖蛋白外结构域、脂质双层和内部核衣壳组成。特别是，RNA核心颜色深且致密，衣壳和脂质双层都清晰可见，衣壳形成规则的六边形，E糖蛋白胞外域形成条纹而不是可见的尖峰。这些病毒的直径范围为50-75纳米，在某些病毒中甚至超过100纳米，平均直径为60纳米。蔗糖梯度上的密度为45-60%。通过TEM成像获得了DTMUV的超微结构，具有完整的内部和外部结构。

[1] Luo X , Liu Y , Jia R ,et al.Ultrastructure of duck Tembusu virus observed by electron microscopy with negative staining[J].Acta Virologica, 2018, 62(3):330-332.

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