【摘要】 采用CCK-8法、FOW流式细胞仪和BrdU法检测不同氧浓度下OA-FLSS和RA-FLSS的增殖情况。

低氧是类风湿关节炎(RA)滑膜微环境的重要特征之一，在滑膜增生中起重要作用[1,2]。在细胞存活方面，成纤维细胞样滑膜细胞受低氧的影响相对较大。相反，RA患者的成纤维细胞样滑膜细胞(RA-Fls)对缺氧诱导的细胞死亡具有特别的抵抗力。研究的目的是评价骨关节炎患者成纤维细胞样滑膜细胞(OA-FLSS)和类风湿关节炎滑膜细胞(RA-FLSS)是否具有相同的低氧适应能力。采用CCK-8法、FOW流式细胞仪和BrdU法检测不同氧浓度下OA-FLSS和RA-FLSS的增殖情况。用AV/PI、TUNEL和Western印迹法检测细胞凋亡，用电子显微镜、激光共聚焦显微镜和Western印迹法观察线粒体吞噬作用，流式检测线粒体膜电位和ROS的状态，用Western印迹和RT-PCR法检测BNIP3和HIF-1α。BNIP3的沉默是通过隐形RNA系统技术实现的。缺氧后，OA-FLSS的存活率下降，而RA-FLSS的增殖活性进一步增强。低氧可诱导RA-FLSS细胞凋亡增加，丝裂原吞噬抑制，但对RA-FLSS细胞无影响。低氧导致了更持久的适应性反应。RA-FLSS对HIF-1α转录调控基因表达的影响更为显著。有趣的是，BNIP3的表达高于OA-Fls，并且表现出更强的有丝分裂和增殖活性。BNIP3 siRNA实验证实了BNIP3在RA-FLSS存活中的潜在作用。抑制BNIP3后，细胞增殖、吞噬能力下降，细胞凋亡率增加。RA-FLSS通过吞噬有丝分裂维持细胞内氧化还原平衡，促进细胞在低氧条件下存活。OA-FLSS的吞噬作用太小，不能维持线粒体的氧化还原平衡，从而导致细胞凋亡。BNIP3在低氧条件下对OA-FLSS和RA-FLSS吞噬作用的影响。

 

[1]Cai L, et al. 7-Hydroxycoumarin mitigates the severity of collagen-induced arthritis in rats by inhibiting proliferation and inducing apoptosis of fbroblast-like synoviocytes via suppression of Wnt/β-catenin signaling pathway. Phytomedicine. 2022;94: 153841.

[2]Converse A, Thomas P. Androgens promote vascular endothelial cell proliferation through activation of a ZIP9-dependent inhibitory G protein/PI3KAkt/Erk/cyclin D1 pathway. Mol Cell Endocrinol. 2021;538: 111461.

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