【摘要】 流式细胞术可以分析样本中不同的细胞亚群，这将揭示这些亚群中细胞死亡标志物的表达，而不仅仅是给出整个群体的单一结果。

几十年来，流式细胞术被广泛用于测量细胞凋亡，但研究人员没有明确的方法来使用这项技术确定其他形式的细胞死亡。流式细胞术可以分析样本中不同的细胞亚群，这将揭示这些亚群中细胞死亡标志物的表达，而不仅仅是给出整个群体的单一结果。H.L. Lee等人[1]描述了一种流式细胞术测定，通过使用抗RIP-3（受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶3）和抗活性胱天蛋白酶3荧光标记抗体和可固定的活-死荧光染料，充分实现了这一潜力。这允许确定活的和死的种群中坏死、细胞凋亡和RIP1依赖性细胞凋亡的程度。坏死是通过RIP3的上调来鉴定的，而RIP1依赖性细胞凋亡是通过活和死群体中RIP3/活性半胱氨酸蛋白酶-3事件的双阳性来描述的。凋亡细胞由活性半胱氨酸蛋白酶-3+ve/RIP3-ve表型。Jurkat细胞（人急性T细胞白血病细胞系）作为研究坏死、RIP1依赖性细胞凋亡和细胞凋亡的模型。细胞未经处理或用TNFa、紫草素处理24小时。在TNFa或紫草素治疗之前，还用坏死阻断剂RIP1抑制剂GSK’481或坏死抑制素-1预处理细胞2小时。因此，与单独的药物治疗相比，这种具有阻断性坏死的细胞定向凋亡，其应当增强，。在TNFa或紫草素治疗之前，用泛胱天蛋白酶阻断剂zVAD预处理2小时应阻断细胞凋亡，从而引导细胞坏死。足叶乙甙用于在24小时后诱导细胞凋亡，然后也通过用zVAD预处理2小时来阻断细胞凋亡。泛胱天蛋白酶阻断剂zVAD和RIP1抑制剂GSK’481或坏死抑制素-1揭示了Jurkat细胞这类亚群的有趣调节。这种使用两种抗体和一种可固定的生存能力探针的新型流式细胞术检测为研究人员提供了对各种形式的细胞死亡调控形式的深入分析，这是该领域的一个重大方法进步。

[1]H.L. Lee, R. Pike, M.H.A. Chong, A. Vossenkamper, G. Warnes, Simultaneous flow cytometric immunophenotyping of necroptosis, apoptosis and RIP1-dependent apoptosis, Methods, Volumes 134–135, 2018, Pages 56-66.

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