【摘要】 结果表明，用5、10和20 lg/ml的7-AAD染色，比1 lg/ml的7-AAD染色更适合于流式细胞术中细胞凋亡的定量。

细胞凋亡是由胱天蛋白酶协调的，胱天蛋白酶是一个半胱氨酸蛋白酶群，在特定的天冬氨酸残基的羧基末端切割其底物。这些蛋白酶通常以非活性酶原的形式存在于健康细胞中，但当受到刺激时，它们会发生自溶切割，从而变得完全活性。随后，它们在一个或两个特定位点切割底物，这可能导致底物的激活、失活、再定位或重塑。因此，许多裂解的片段在细胞凋亡过程中保持完整，并且可以使用底物特异性抗体进行检测。Crowley等[1]运用蛋白质印迹检测方法，识别裂解片段的抗体可用于特异性标记发生半胱天冬酶裂解的细胞，通过流式检测对这些细胞进行定量。已经产生了许多特异性识别caspase裂解片段的抗体，包括识别caspase-3裂解形式的抗体。这种胱天蛋白酶负责细胞凋亡过程中的大部分蛋白水解，对裂解的胱天蛋白酶-3的检测被认为是正在死亡或已经死于细胞凋亡的细胞的可靠标记。Zembruski等[2]运用7-氨基放线菌素D（7-AAD）对细胞染色，区分活细胞、凋亡细胞和晚期凋亡/死亡细胞。比较了用1、5、10和20 lg/ml的7-AAD与PE–Annexin V细胞凋亡检测试剂盒和细胞死亡检测ELISAPLUS在淋巴细胞和CEM人白血病细胞中染色20分钟所获得的结果。结果表明，用5、10和20 lg/ml的7-AAD染色，比1 lg/ml的7-AAD染色更适合于流式细胞术中细胞凋亡的定量。

[1] Crowley L C, Waterhouse N J. Detecting cleaved caspase-3 in apoptotic cells by flow cytometry[J]. Cold Spring Harbor Protocols, 2016, 2016(11).

[2] Zembruski N C L, Stache V, Haefeli W E, et al. 7-Aminoactinomycin D for apoptosis staining in flow cytometry[J]. Analytical biochemistry, 2012, 429(1): 79-81.

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