【摘要】 描述了对现有制备程序的简单修改，用于通过冷冻扫描电镜检查脆弱的植物组织和昆虫与植物的相互作用。

描述了对现有制备程序的简单修改[1]，用于通过冷冻扫描电镜检查脆弱的植物组织和昆虫与植物的相互作用。将样品附着在带有胶体石墨的短管上，引入气闸，短暂抽空，然后转移到制备室的低温台上，在那里进行完全抽空和缓慢冷却。溅射镀金后，将样品转移到显微镜冷台上并在 15 kV 下进行检查。方案可在多种植物和昆虫标本上重现，并且可以在开始冷却仪器后 45 分钟内拍摄显微照片。

 

从组织封片到拍照仅需 5-10 分钟。尽管毫无疑问存在大的内部冰晶，但所使用的缓慢冷冻速度不会破坏或扭曲我们迄今为止检查过的任何组织的外表面。这已通过液氮泥浆中冷冻组织的平行检查得到证实。与其他标准技术相比，该方法具有许多优点：

1.优于风干，风干会导致脆弱的植物组织塌陷和扭曲；

2.与固定、脱水、临界点干燥相比，简单、快速、化学非侵入性；

3.标本在冷冻扫描电镜环境中稳定，可与环境扫描电镜对比进行悠闲观察；可以用这种方式检查

4.大块组织。

 

高分辨率冷冻扫描电镜虽然对大多数组织都能提供出色的结果，但它是一个严格且耗时的过程，并且需要相当小的样本。并非所有标本都被证明适合使用该方案进行制备。在培养皿上生长的真菌菌丝体的研究中遇到了困难，培养皿中的菌丝和繁殖结构崩溃了。

 

这些组织被成功地冷冻在氮气泥浆中，直接转移到显微镜中，所有冰都升华掉了。然后将样品移至冷冻制备室进行金涂层。对于一些冰冻标本，我们观察到距存根相当远的四肢在表面冰升华过程中表现出冷冻干燥的迹象，这表明四肢的温度远高于存根处的温度。

 

描述的协议与 Kaneko 等人 (1985)[2] 描述的观察“活”组织的协议没有什么不同，其中样品被快速安装，放置在预冷台上，抽空并检查无涂层。然而，由于光束损坏，他们的方法不适合高放大倍率的观察。在检查内部结构时，必须考虑冷冻的方法。我们的方案中使用的相对较慢的冷冻导致细胞内形成大的冰晶。对于总体结构观察，这可能不是问题，但如果需要元素分析，那么冰晶的形成将导致元素的显着重新分布。在这种情况下，快速冷冻显然是必要的。

 

[1]Brookes, B. & Small, E. (1988) Enhanced floral analysis by low temperature scanning electron microscopy. Scanning Microsc. 2,247–256.

[2]Kaneko, Y., Matsushima, H., Wada, M & Yamada, M. (1985) A study of living plant specimens by low-temperature scanning electron microscopy. J. Electron Microsc. Technique, 2, 1–6

 

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