【摘要】 低温保护剂的缺乏对低温断裂后的升华是必不可少的，因为低温保护剂减缓了升华。

冷冻扫描电子显微镜(cryo-SEM)检查完全水化冷冻的化学和生物标本用于形态学研究已被广泛使用。近十年来，由于低温观测模块的改进，低温扫描电镜观测得到了长足的发展。

 

然而，样品的低温制备是低温观察质量的关键，并且非常具有挑战性。冷冻后的组织保持水分，标本成分迅速固定，而使用二氧化碳或六甲基二氮杂烷(HMDS)的临界点干燥则不是这种情况。冷冻浸泡新鲜然后将样品水化放入液冷剂中[1]。这项技术通常是冷冻断裂和冷冻干燥。

 

氮泥冷冻技术也是基于样品的快速冷冻。然而，这种技术导致的氮液体加热现象通过冷冻导致缓慢冷却，并导致由于成核和冰晶生长而形成水晶体。通常情况下，氮气污泥固定在装有低温处理室的扫描电镜系统中。

 

许多冷冻技术被提出作为氮泥的替代品。氟利昂、乙烷、丙烷、丙烷喷射和高压冷冻(HPF)冷冻固定。与上述技术不同，HPF可以在不使用冷冻保护剂的情况下将样品冷冻至约200 μ m的厚度 (尽管保存的冷冻样品厚度取决于样品种类)。

 

低温保护剂的缺乏对低温断裂后的升华是必不可少的，因为低温保护剂减缓了升华。HPF使用高压和极低温度来实现高冷却速率。HPF是一种生产保存水合样品的玻璃冰的技术。该技术可防止冷冻人工制品，并被推荐用于更好地保存水合样品。

 

经HPF处理后，试样进行低温断裂和冷冻刻蚀，再进行SEM检测。这种冷冻蚀刻对应于冷冻水(冰)在低温和高真空下的升华。

 

[1] Ali R , El-Boubbou K , Boudjelal M .An easy, fast and inexpensive method of preparing a biological specimen for scanning electron microscopy (SEM).[J].MethodsX, 2021, 8:101521.

 

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