二极管阵列高效液相色谱法测定土壤腐植酸中氨基糖

氨基糖（Amino sugars, ASs）也被称为己糖胺，是单糖的衍生物，其中一个羟基被一个氨基取代，在生物聚合物和生物大分子中主要是乙酰化的。as是在各种动物物种、植物、种子、真菌和细菌中发现的具有重要生物学意义的化合物，因此它们可能存在于土壤中，并在土壤中发挥多种功能。它们对土壤有机氮（5 - 12%）和土壤有机碳（约3%）有显著贡献，它们影响土壤的物理和化学基本特征，并且已被证明是土壤中不同类型微生物残留物积累的有用指标。ASs种类繁多，但葡萄糖胺（GlcN）、半乳糖胺（GalN）和甘露糖胺（ManN）是土壤及其组分中含量最多、最重要的ASs。

Erik Beňo等人¹在建立相对简单、快速、灵敏、选择性强的高效液相色谱（HPLC）光度检测方法（二极管阵列检测;用DEEMM柱前衍生化反应后从泥炭和土壤中提取的腐植酸样品的水解液中氨基酸糖的测定。

图1 砷酸钠分析标准品及砷酸钠混合物分离色谱图。色谱图:氨基葡萄糖（A）;mannosamine （B）;半乳糖胺（C）;as混合物（D）. as混合物的峰识别:（1）ManN 1;（2） GalN 1;（3） GlcN 1;（4） galn2;（5） glcn2;（6） ManN 2。

图2 ASs和AAs混合物分离的色谱图。

由于ASs是糖单体的衍生物，它们也形成两种异头化合物（α-和β-异头化合物）。当衍生化时，它们处于平衡状态，因此在色谱图中产生两个峰（图1A-C），因此所提出的HPLC方法不仅分离单个AS，而且分离每种AS的异头化合物形式，并且为了验证方法，单独评估了每种异头化合物。各砷化砷分析标准品及砷化砷混合物分离的色谱图如图1所示。从As异头峰之间的升高基线可以估计，与分离时间相比，突变反应相对较慢，因此这一事实对As的测定没有明显影响。在给定条件下，由于DEEMM的官能团与As的氨基结合形成吸收紫外线的化合物，因此可以测定As。采用HPLC-DAD法测定了不同产地土壤和泥炭水解液中砷的含量。考虑到这些复杂环境样品的性质，除了ASs外，样品中很有可能含有其他结构相关的氨基化合物，主要是AAs，这些化合物也会与DEEMM试剂发生衍生化反应。为了准确定量HAs水解物中as的浓度水平，在样品分析之前进行了as和AAs混合物的分离。选择了与as洗脱特性相似的7个ASs （Arg、Gln、His、Gly、Ser、Asp和Asn）。色谱分离如图2所示。

综上所述，该研究建立了一种分离测定土壤和泥炭腐植酸水解物中三种砷的HPLC-DAD方法。对于所有评价的ASs，在线性和范围、灵敏度、选择性、精密度、检出限和定量限以及稳定性方面都取得了令人满意的结果。该方法也可用于分析其他低浓度含氨基化合物。据作者所知，目前还没有报道的方法分离和同时测定葡萄糖胺，半乳糖胺，甘露糖胺在他们的两个异构体形式在HAs样品中使用DEEMM作为衍生试剂。进一步的研究将涉及使用质谱分析ASs及其在生物和环境样品中的测定，包括FAs和人类素。验证将进一步包括可重复性评价。

1.Beňo, E.;  Góra, R.; Hutta, M., Development of a precolumn derivatization HPLC method with diode-array detection for the determination of amino sugars in peat and soil humic acids. J. Sep. Sci. 2018, 41 （4）, 814-821.

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