【摘要】 通过检测亚精胺对T细胞活力和增殖的影响，确定最佳亚精胺浓度。

嵌合抗原受体T (CAR-T)细胞疗法在治疗血液恶性肿瘤方面取得了显著的成功，但仍有大约40-50%的患者预后不满意。导致CAR-T细胞治疗失败的原因极其复杂，此外，移植物抗宿主病(GVDH)、神经毒性和细胞因子释放综合征(CRS)也可导致CAR-T细胞治疗后的复发。由于亚精胺在免疫中的天然优势，在Hongxia Wang等人的工作中研究了亚精胺预处理对纳米体CAR-T细胞(Nb CAR-T)介导的细胞毒性的影响及其潜在机制。

 

图1亚精胺促进T细胞增殖

 

通过检测亚精胺对T细胞活力和增殖的影响，确定最佳亚精胺浓度。设置了不同浓度的亚精胺(0μM、0.5μM、5μM、10μM、20μM、100μM和500μM)，以评价其在T细胞培养中的最佳剂量。通过细胞活性检测，发现0.5μM和5μM处理的CD8+T细胞保持正常活力，而其他组T细胞随着剂量的增加而恶化(图1A)。接下来，观察到0.5μM和5μM亚精胺预处理后的T细胞增殖增强，增殖群体分别为76.5%、73.2%(图1B)。

 

同时统计亚精胺处理后T细胞的绝对数量。0.5μM和5μM亚精胺组T细胞数量显著升高(p<0.001)。相比之下，T细胞在100μM和500μM时复制减弱，这与活力检测结果一致(图1C)。综合考虑其对T细胞毒性较小，选择0.5μM和5μM作为初步工作浓度。

 

图2 亚精胺增强CD19 CAR-T细胞的细胞毒性

 

为了研究亚精胺对CAR-T细胞毒性的影响，首先采用ELISA法检测IL-2和IFN-γ的分泌。在与Daudi细胞而非K562细胞共培养后，我们观察到经亚精胺预处理的CAR-T细胞的细胞因子产量升高(图2A-D)。同时， LDH数据表明，亚精胺预处理的CAR-T细胞对Daudi细胞表现出优越的抗肿瘤活性。

 

有趣的是，注意到，即使在高肿瘤负荷下，5μM的亚精胺处理也能显著提高CD19 CAR-T细胞的细胞毒性80%，而不是0.5μM(图4E)。然而，当K562细胞取代Daudi细胞时，获得了更低的细胞毒性(图4F)。上述结果表明，体外亚精胺处理后，cd19 CAR-T细胞对淋巴瘤细胞的细胞毒活性有所提高

 

结果表示亚精胺作用于T细胞的最佳浓度为5μM。与对照组相比，亚精胺预处理的CD19 CAR-T细胞或Nb CAR-T细胞的抗原依赖性增殖增加。在亚精胺存在下，中枢记忆T细胞(TCM)在CAR-T细胞群中占主导地位。经亚精胺预处理的CAR-T细胞经Daudi细胞刺激后，IL-2和IFN-γ的分泌明显增强。在亚精胺的帮助下，CAR-T细胞裂解Daudi细胞的能力得到增强，即使在更高的肿瘤负荷下也是如此。经亚精胺预处理的Nb CAR-T细胞能够在体内控制肿瘤细胞，从而延长小鼠的生存期。

 

[1] Wang H, Jiang D, Liu L, Zhang Y, Qin M, Qu Y, Wang L, Wu S, Zhou H, Xu T, Xu G. Spermidine Promotes Nb CAR-T Mediated Cytotoxicity to Lymphoma Cells Through Elevating Proliferation and Memory. Onco Targets Ther. 2022;15:1229-1243,https://doi.org/10.2147/OTT.S382540

 

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