【摘要】 详解生物冷冻切片技术的操作原理、样本固定流程与切片技巧，包含低温恒冷箱使用规范、脂肪组织处理方案及术中快速病理诊断应用，附权威实验参考文献。

冷冻切片技术通过低温急速冷冻使生物组织达到适宜硬度，利用冰晶支撑结构实现高效切割。相比传统石蜡切片，该技术省去脱水和浸蜡等繁琐流程，大幅缩短制片时间至分钟级，成为术中快速病理诊断的核心手段。目前主流方法包括低温恒冷箱冷冻切片、二氧化碳冷冻法等，其中恒冷箱技术因温控精准性在现代实验室重新获得重视。

 

图1 阿勒泰大尾羊不同部位脂肪组织冰冻切片油红O滴染法染色 A.尾脂;B.皮下脂;C.肾周脂

 

一、样本采集规范

• ​时效性控制：组织离体后需在5分钟内速冻，防止蛋白质变性导致的细胞自溶
• ​操作要点：使用预冷器械取材，避免挤压损伤组织结构

 

​二、组织固定流程

1.​固定剂选择：4%多聚甲醛溶液（4℃环境）

2.时间控制：根据组织密度调整（1小时至过夜）

3.后续处理：

  • PBS缓冲液冲洗3次（10-30分钟/次）
  • 20%蔗糖溶液渗透（≥1小时）
  • 添加0.05%NaN3防腐剂长期保存

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三、切片操作技术

采用专业冷冻切片机完成关键步骤：

1. 切片厚度：4-20μm（根据诊断需求调整）  

2. 载玻片处理：预涂粘附剂防脱片  

3. 干燥保存：室温干燥1小时后可进行免疫组化染色，或-80℃密封存储

 

技术优势：

✓ 完美保留脂类/神经组织活性

✓ 避免化学试剂导致抗原失活

✓ 支持组织化学特殊染色

 

参考文献：[1]王肖燕,王金泉,姚刚,张继红.脂肪组织冰冻切片油红O滴染法的建立[J].家畜生态学报,2014,35(08):58-60+96.

 

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