生物冷冻扫描电子显微镜（Cryo-SEM）-科学指南针

项目简介

冷冻扫描电镜（Cryo-SEM）是基于超低温冷冻制样寄传输技术，可以直接观察液体、半液体样品；生物样品常规制样方法中干燥过程可能对含水量较高的样品产生影响，而冷冻技术能避免细胞变形，具有制样简单快速的优点；另外与同样可以观察含水样品的环境扫描电镜相比，冷冻扫描可在高真空状态下观察，提高了分辨率，并且可以对样品进行断裂，但成本和技术要求相对较高。

技术服务路线

结果展示

图1.真菌散囊孢子

图2.真菌菌丝图3.霉菌孢子头

样品要求

送样方式

可接收凝胶、蛋白、乳液、食品、动物组织、植物组织、细胞、昆虫、污泥、生物膜及微生物等样品类型。

1.粉末样品：50-100mg。

2.液体样品：提供100-200μl，提供合适的浓度（上机前直接滴加样品，不做稀释或浓缩），为了保证有足够的备用量，可多提供一些，乳液为避免破乳需要装满1.5ml离心管。

3.薄膜样品：面积大于3 mm*3 mm，极软样品建议平铺在可机械断裂基底上。

4.块状固体样品-观察表面：小于3 mm (长)*2 mm (宽)*2 mm (高)，硬的材料需要切割好暴露出拍摄面，如有特殊要求请提前联系工作人员确认。

5.块状固体样品-观察断面：小于3 mm (长)*2 mm (宽)、高度做到3-4 mm，常规材料机器冷刀断裂，硬质材料如需切割断面请提前咨询工作人员确认。

6.生物类样品：样本需新鲜取材，可至于离心管内低温寄送，若担心寄送过程样品变化，可加入2.5%戊二醛固定液并置于1.5ml离心管内，若固定后不能立即寄出，请在4℃保存。

7.生物类样品-真菌/真菌：可寄送涂布后的平板，菌落/菌丝长出后即可寄出。

寄送要求

1.可以提供新鲜样品低温寄送，如果担心寄送过程样品变化，可以用2.5%戊二醛固定后寄送。

2.若样品保存条件是常温，需要常温寄送。

3.若样品保存条件是4℃，需要2-3个冰袋运输。

4.若样品保存条件是-20℃或-80℃，需要干冰运输，干冰消耗量以7kg/d计算，保证足够量的干冰，确保在运输时间内能维持低温。

服务周期

一般为样品接收后的1-2周左右，如遇法定假期需要顺延，具体实验周期及送样时间请与科学指南针工作人员沟通确认，谢谢！

交付内容

1.每样提供8张拍摄图片（不提供分析服务）。

2.默认手机或者电脑云视频拍摄，每个样本拍摄时长在30min以内，超出时间500/30min收费。

3.由于冷冻扫描样品制备需要在仪器里完成冷冻升华及断裂喷涂等步骤，整个过程需要15min机时，若因拍摄问题暂停会收取300元/样的样品制备费用。

4.如需照片数量超过将产生额外费用。

5.结果反馈请在测试完成一周内，不建议回收样品，如有需要请提前反馈给指南针工作人员。

常见问题

1. 冷冻扫描样品具体处理流程？

在样品台上涂抹导电炭胶，用镊子夹起样品粘在导电炭胶上。
液氮雪泥速冻：将粘有样品的样品台投入液氮雪泥中速冻30s后，使用低温冷冻制备传输系统在真空状态下将其转移至样品制备腔室进行升华镀金处理。
升华和镀金：样品在- 90℃升华10min之后以10 mA的电流溅射镀金60 s，送入扫描电镜样品室观察，冷台温度-140 ℃，加速电压 5 kv。

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