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负染色技术
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部分论文致谢
项目简介
负染色技术是一种制备电子显微镜样品图像呈现复反差的技术。用于观察样品中的颗粒性物质或生物大分子。用金属盐(如磷钨酸钠、醋酸铀等)对铺展在载网上的样品进行染色，使整个载网都铺上一层重金属盐，而有凸出颗粒的地方则没有染料沉积。由于电子密度高的重金属盐包埋了样品中低电子密度的背景，增强了背景散射电子的能力以提高反差，在图像中背景是黑暗的，而未被包埋的样品颗粒则透明光亮，这种染色方法称为负染技术。负染色是只染背景而不染样品，与光学显微镜样品的染色正好相反。目前最常用的负染液是醋酸铀或者磷钨酸，此外甲酸铀、硅钨酸、钼酸铵等也常作负染色剂用。
服务流程
1.将样品取出10 μL。
2.吸取样品10 μL滴加于铜网上沉淀1 min，滤纸吸去浮液。
3.醋酸双氧铀10 μL滴加于铜网上沉淀1 min，滤纸吸去浮液。
4.常温干燥数分钟。
5.80-120 kv进行电镜检测成像。
6.获得透射电镜成像结果。
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结果展示
样品要求
送样要求
可接收样品类型：脂质体、外泌体、囊泡类、蛋白、纤维素、细菌等，其他类型样品请咨询科学指南针工作人员。
1.粉末样品20mg左右，并告知配置比例。
2.液体样品提供100-200μl，提供合适的浓度（上机前直接滴加样品，不做稀释或浓缩）。
①脂质体：送样体积100-200μL，确保制备过程中没有脂质沉淀或未形成囊泡的脂质胶束，浓度在1-2mg/mL，缓冲液尽量避免使用PBS或者Tris等易产生盐结晶的缓冲液，推荐置换成超纯水或低浓度非结晶性缓冲液。
②外泌体/囊泡：送样体积不少于50μL，外泌体悬液浓度建议不低于0.5mg/mL，样品应尽可能纯净，避免混杂大量的蛋白质聚合物、细胞碎片等，这些杂质会与目标颗粒竞争结合染色剂，造成背景杂乱；缓冲液尽量避免使用PBS或者Tris等易产生盐结晶的缓冲液，推荐置换成超纯水或低浓度非结晶性缓冲液。
③蛋白样品：送样体积不少于50μL，缓冲液尽量避免使用PBS或者Tris等易产生盐结晶的缓冲液，推荐置换成超纯水或低浓度非结晶性缓冲液。
④病毒：送样体积50-100μL，需告知生物安全等级，灭活处理（如使用β-丙内酯、γ-射线照射等）后寄送，未灭活的高风险样品会拒收退回，必须去除细胞培养基、磷酸盐缓冲液（PBS）和 Tris 缓冲液。
建议： 在送样前，外泌体/脂质体/囊泡类/病毒类可使用纳米颗粒追踪分析（NTA）或动态光散射（DLS）来准确测定样品的浓度和粒径分布，并确保样品单分散性良好。
3.细菌类样品如需要观察菌毛或鞭毛请寄送单菌落平板，并于菌落长出后立即寄送。
负染色的效果可能受到样本的运输时间影响，如需负染色，关于样本准备和测试安排，请提前沟通。
寄送方式
1.负染色的效果受到样本的运输条件和时间影响
2.若样品保存条件是常温，需要常温寄送。
3.若样品保存条件是4℃，需要2-3个冰袋运输。
4.若样品保存条件是-20℃或-80℃，需要干冰运输，干冰消耗量以7kg/d计算，保证足够量的干冰，确保在运输时间内能维持低温。
服务周期
一般为样品接收后的1周左右，如遇法定假期需要顺延，具体实验周期及送样时间请与科学指南针工作人员沟通确认，谢谢！
交付内容
每样提供10张拍摄图片（不提供分析服务），如需照片数量超过10张将产生额外费用。
结果反馈请在测试完成一周内，不建议回收样品，如有需要请提前反馈给指南针工作人员。
常见问题
1. 样品需要怎么准备?
液体样品提供100-200μl，提供合适的浓度（上机前直接滴加样品，不做稀释或浓缩）；粉末样品20mg左右，并告知配置比例。
2. 样品需要如何寄送？
根据样品的保存条件，常温保存可直接寄送；4℃保存可以加2-3个冰袋寄送，冰袋一定不要直接接触样品管，用泡沫包裹样品，避免样品结冰，注意冰袋融化不要弄湿预约单、样品管上编号，编号需要按照送样单上的编号，尽量简化编号。
如果是外泌体样品需要干冰寄送，干冰消耗量以每天7kg/d计算，保证足够量的干冰。
