荧光显微镜

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仪器型号 Olympus BX51；Olympus IX73

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项目简介

荧光显微镜是以紫外线为光源，用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性研究的工具之一。

结果展示

图1.MC3T3-E1细胞骨架染色，图2.是NIH3T3 live/dead染色。

样品要求

样品要求：

1、菌液/污泥/污水类样品

① 样品量：5000 rpm离心10 min，可得到绿豆大小沉淀，参考图（1.5 mL离心管）大小的菌体沉淀

②细菌类需要死活染色/ROS染色的，一般加冰袋泡沫盒4度保存，样品不和冰袋接触。

③蛋白/多糖类染色，一般加冰袋泡沫盒4度保存或者2.5%的戊二醛固定4度保存，样品不和冰袋接触。

④污泥类样品可以进行冰切或者刀切，冰切收费50/样。

2、生物膜样品

①样品量：金属/瓷砖/岩石等块体类建议长宽高尺寸不超过1 cm，薄膜类直径尺寸不超过2 cm；且均要求样品表面平整，需要标出拍摄面。

②一般加冰袋泡沫盒4度保存，样品不和冰袋接触

③若在爬片上培养生物膜，可将爬片粘于培养皿底部，充满培养基，封口膜密封完全，再4度保存。

3、植物类

①植物类样品可进行简单冰切及刀切，软化等特殊类请走病理组织切片测试项目

②一般加冰袋泡沫盒4度保存，样品不和冰袋接触

③做过的植物类样品淀粉、胡萝卜，土豆、叶片、根、茎，拟南芥等。

4、需要与细胞共培养的样品：

①块体类—薄膜、布料、金属块、纸片、凝胶等

送样量：

（1）与细胞的作用方式为直接接触的话，至少1个/种细胞/时间点；

（2）样本处理方式为浸提的话，可参考国标ISO 10993-12 2007中的浸提方式浸提，根据浸提方式按量和检测时间点提供；

制样要求：若是需要把细胞接种到材料上的话，金属块、凝胶类样本须制备成统一大小的圆形/方形，建议制备直径为10-15 mm圆形。布料、纸片类样本可代为裁剪，默认制备直径为15 mm。

②液体类

送样量：根据测试时样本浓度和检测时间点而定，按照单次检测需要的3-5倍的量寄送；若采用稀释后样本测试，则须告知稀释倍数及工作液浓度；若溶剂为有机溶剂（如DMSO，醇类，酚类等），最高工作液浓度中，溶剂的占比低于0.5%；。

③粉末类

送样量：根据测试时样本浓度和检测时间点而定，按照单次检测需要的3-5倍的量寄送；

（1）可溶性粉末：注明溶剂的种类（如无水乙醇，异丙醇，DMSO，培养基，PBS或者生盐水等），当样品对溶剂有特殊需求时，请在送样时附加所需溶剂；

（2）不可溶粉末：注明样本性质，灭菌方式，及分散为均匀悬浮液所需必要步骤

5、需要提供清楚激发/发射波长，拍摄倍数等要求，

6、染色剂，标明染料名称和拍摄条件（激发/发射波长，），指南针常见染色剂及收费见已有染料见荧光显微镜仪器详情常见问题2：https://www.shiyanjia.com/buffet-details-151.html；若需要特殊染料，本公司可代购或自行提供（需要附带染色使用说明书）

7、细胞类样品直接拍摄，需要封片后常温避光邮寄。

8、固体类直接拍摄样品建议长宽不超过20mm，厚度不超过10mm，重量不超过10g，一定标出测试面。

服务周期：

一般为样品接收后的2-3周，具体实验周期及送样时间请与科学指南针工作人员沟通确认，谢谢！

交付内容：

提供4个视野照片，结果反馈请在测试完成一周内，不建议回收样品，如有需要请提前反馈给指南针工作人员。

常见问题

1. 平台可提供染色剂及收费

染料名称	染色剂使用费	最大激发波长（nm）	激发器波长（nm）	发射波长/范围（nm）	结合物质
AO染色液	20	490	488	与DNA的结合，其荧光发射峰为530nm;与RNA的结合，其荧光发射峰为640nm	DNA/RNA
CFSE	20	498	488	517	染活细胞
DAPI	20	359	405	457	可染DNA/RNA
FITC	20	491	488	516	非特异性蛋白染料可染蛋白/氨基酸/糖类
H33342	20	352	405	454	可染DNA、核酸
Hoechst33258	20	352	405	454	细胞核染料
Hoechst33342	20	352	350	454	细胞核染料
Nile red (NR)	20	559	559	635	可染脂质
PI	20	537	514（559)	615	可染细胞核
罗丹明B	20	546	561	580	非特异性蛋白染料
耐尔蓝A	20	631	633	660	非特异性蛋白
溶酶体红色荧光探针	150	561	561	592	溶酶体
溶酶体绿色荧光探针	150	501	488	509	溶酶体
线粒体绿色荧光探针	150	490	488	512	线粒体
线粒体红色荧光探针	150	578	561	598	线粒体
线粒体深红色荧光探针	150	641	633	662	线粒体
Calcein-AM/PI	50	501（537）	488（559）	521（615）	可染活细胞/死细胞
ConA-FITC	50	491	488	516	α多糖
ConA-iFlour 555	50	557	561	570	α多糖
ConA-Alexa Fluor 594	50	590	561	618	α多糖
Calcofluor white	50	350	405	432	可染β-D-吡喃葡萄糖多糖
DCFH-DA	50	504	488	525	可染ROS
DiD	50	646	633	663	细胞膜染料
Dil-细胞膜橙红色荧光探针	50	550	561	567	细胞膜染料
DiO-细胞膜绿色荧光探针	50	483	488	501	细胞膜染料
SYBR GreenⅠ	50	498	488	522	核酸
罗丹明123	50	508	488	528	测线粒体膜电位
FITC-鬼笔环肽	100	491	488	516	可染细胞骨架
SF633标记鬼笔环肽	100	630	633	650	细胞骨架
罗丹明-鬼笔环肽	100	540	514	565	可染F-肌动蛋白
Syto63	100	657	633	673	可染全部细胞
Syto9	100	485	488	498	可染DNA/RNA
Syto9/PI	100	485（537）	488（559）	521（616）	可染活细菌/死细菌
荧光染料激发/发射波长参考于https://www.aatbio.com/fluorescence-excitation-emission-spectrum-graph-viewer

2. 浸提液常用国标ISO 10993-12 2007介绍

浸提液制备标准-表面积/浸提液体积
厚度（mm）	浸提比例（表面积或体积） ±10%	材料形式举例
＜0.5	6 cm²/ml	薄膜
0.5-1.0	3 cm²/ml	金属薄片、硅片
＞1.0	1.25 cm²/ml	金属块
不规则固体材料	0.2 g/ml	粉末、粒状、泡沫、非吸收剂
不规则多孔材料 (低密度材料)	0.1 g/ml	薄膜、海绵
注意：目前还没有标准的浸提方法来测试吸收剂和吸水溶胀的水溶胶类样本。
注意：目前还没有标准的浸提方法来测试吸收剂和吸水溶胀的水溶胶类样本。

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