激光共聚焦扫描显微镜（CLSM）-科学指南针

项目简介

一、简介

Confocal 利用放置在光源后的照明针孔和放置在检测器前的探测针孔实现点照明和点探测，来自光源的光通过照明针孔发射出的光聚焦在样品焦平面的某个点上，该点所发射的荧光成像在探测针孔上，该点以外的任何发射光均被探测针孔阻挡。照明针孔与探测针孔对被照射点或被探测点来说是共轭的，因此被探测点即共焦点，被探测点所在的平面即共焦平面。计算机以像点的方式将被探测点显示在计算机屏幕上，为了产生一幅完整的图像，由光路中的扫描系统在样品焦平面上扫描，从而产生一幅完整的共焦图像。只要载物台沿着Z轴上下移动，将样品新的一个层面移动到共焦平面上，样品的新层面又成像在显示器上，随着Z轴的不断移动，就可得到样品不同层面连续的光切图像。

二、服务周期

一般为样品接收后的2-3周，具体实验周期及送样时间请与科学指南针工作人员沟通确认，谢谢！

<结果反馈请在测试完成一周内，不建议回收样品，如有需要请提前反馈给指南针工作人员>

结果展示

一、交付内容

1. 选择2D模式拍摄：每个样品交付3-4张图片，其中

（1）若一个样品拍摄1个倍数，拍4个视野；

（2）若一个样品拍摄2个倍数，各拍摄2个视野；

（3）若一个样品拍摄3个倍数，各拍摄1个视野。

<注：除死活染色外，其他项目还会导出明场图片>

2. 选择3D模式拍摄：一个样品拍摄1个倍数，拍1个视野。

二、结果展示

<图一> 颗粒污泥的胞外聚合物EPS的2D和3D图（针对脂质、蛋白和多糖进行染色）

<图二> I:面筋提取物颗粒染色拍照；II：乳胶颗粒染色拍照；III：生物膜细菌的死活分布3D图；IV:细胞死活染色拍照；V：细胞内线粒体定位；VI: 鬼笔环肽细胞骨架染色；VII: 组织免疫荧光（组织内蛋白定位）；VIII:细胞内荧光探针成像；IX：细胞免疫荧光。

<图三> 细胞成像拍摄放大倍数和效果样图

样品要求

一、菌液/污泥/污水类样品

1. 样品量

5000 rpm离心10 min，可得到绿豆大小沉淀，参考图（1.5 mL离心管）大小的菌体沉淀。

2. 寄送要求

（1）若为细菌类需要死活染色/ROS染色的，一般加冰袋泡沫盒4度保存，样品不和冰袋接触。

（2）若为蛋白/多糖类染色，一般加冰袋泡沫盒4度保存或者2.5%的戊二醛固定4度保存，样品不和冰袋接触。

（3）若为污泥类样品可以进行冰切或者刀切，冰切收费50/样。

二、生物膜样品

1. 样品量

金属/瓷砖/岩石等块体类建议长宽高尺寸不超过1 cm，薄膜类直径尺寸不超过2 cm；且均要求样品表面平整，需要标出拍摄面。

2. 寄送要求

（1）一般加冰袋泡沫盒4度保存，样品不和冰袋接触；

（2）若在爬片上培养生物膜，可将爬片粘于培养皿底部，充满培养基，封口膜密封完全，再4度保存。

三、植物类

1. 说明：

（1）植物类样品可进行简单冰切及刀切，软化等特殊类请走病理组织切片测试项目；

（2）一般加冰袋泡沫盒4度保存，样品不和冰袋接触；

（3）平台做过的植物类样品淀粉、胡萝卜，土豆、叶片、根、茎，拟南芥等。

四、需要与细胞共培养的样品

（一）块体类—薄膜、布料、金属块、纸片、凝胶等

1. 送样量

（1）与细胞的作用方式为直接接触的话，至少1个/种细胞/时间点；

（2）样本处理方式为浸提的话，可参考国标ISO 10993-12 2007中的浸提方式浸提，根据浸提方式按量和检测时间点提供；

2. 制样要求

若是需要把细胞接种到材料上的话，金属块、凝胶类样本须制备成统一大小的圆形/方形，建议制备直径为10-15 mm圆形。布料、纸片类样本可代为裁剪，默认制备直径为15 mm。

（二）液体类

送样量：根据测试时样本浓度和检测时间点而定，按照单次检测需要的 3-5倍的量寄送。

a. 若采用稀释后样本测试，则须告知稀释倍数及工作液浓度；

b. 若溶剂为有机溶剂（如DMSO，醇类，酚类等），最高工作液浓度中，溶剂的占比低于0.5%。

（三）粉末类

送样量：根据测试时样本浓度和检测时间点而定，按照单次检测需要的3-5倍的量寄送；

a. 若为可溶性粉末：注明溶剂的种类（如无水乙醇，异丙醇，DMSO，培养基，PBS或者生盐水等），当样品对溶剂有特殊需求时，请在送样时附加所需溶剂；

b. 若为不可溶粉末：注明样本性质，灭菌方式，及分散为均匀悬浮液所需必要步骤。

（五）无需染色直接拍摄类样品

1. 细胞类样品直接拍摄，需要封片后常温避光邮寄。

2. 固体类直接拍摄样品建议长宽不超过20mm，厚度不超过10mm，重量不超过10g，一定标出测试面。

3. 微米材料直接拍摄类建议进行云视频沟通，且微粒尺寸不低于5微米。

其他说明：

1. 激发和发射波长说明：需要提供清楚激发/发射波长，拍摄类型2D/3D，拍摄倍数等要求；

2. 染料说明：需要您标明染料名称和拍摄条件（激发/发射波长）；

（1）指南针常见染色剂及收费见已有染料见激光共聚焦仪器详情常见问题2；

（2）若需要特殊染料，本公司可代购或自行提供（需要附带染色使用说明书）。

常见问题

1. 目前平台共聚焦有哪些激光器配置？

405nm，458nm，488nm，515nm，559nm，635nm，其他激光器需要单独联系。

2. 平台染料库有哪些染料？

染料名称	激发器波长（nm）	发射波长/范围（nm）	结合物质	染料荧光颜色	单价
Hoechst 33342	405	454	细胞核染料	蓝色	0
DAPI	405	457	可染DNA/RNA	蓝色	0
Lyso-Tracker Green;溶酶体绿色荧光探针	488	509	溶酶体	绿色荧光	20
Lyso-Tracker Red;溶酶体红色荧光探针	559	592	溶酶体	红色荧光	20
LysoBrite Orange;溶酶体橙色荧光探针	633	670	溶酶体	橙色荧光	20
Mito-Tracker Green;线粒体绿色荧光探针	488	512	线粒体	绿色荧光	20
Mito-Tracker Red CMXRos;线粒体红色荧光探针	559	598	线粒体	红色荧光	20
Mito-Tracker Deep Red FM;线粒体深红荧光探针	633	670	线粒体	深红色荧光	20
ER-Tracker Green;内质网绿色荧光探针	488	512	内质网	绿色荧光	50
ER-Tracker Red;内质网红色荧光探针	559	590	内质网	红色荧光	50
DiO;细胞膜绿色荧光探针	488	501	细胞膜染料	红色	20
FITC Phalloidin;FITC标记鬼笔环肽	488	516	可染细胞骨架	绿色荧光	20
SF633 Phalloidin;SF633标记鬼笔环肽	633	650	细胞骨架	红色荧光	20
TRITC Phalloidin;罗丹明标记鬼笔环肽	559	570	可染F-肌动蛋白	红色荧光	20
Fluo-4 AM;钙离子荧光探针	488	540	指示细胞内钙离子含量	绿色荧光	50
Calcein-AM/PI	488（559）	521（615）	可染活细胞/死细胞	绿色/红色	50
Nile red;尼罗红	559	635	可染脂质	红色	0
FITC;异硫氰酸荧光素	488	516	非特异性蛋白染料可染蛋白/氨基酸	绿色	0
Calcofluor white;卡尔科弗卢尔荧光增白剂	405	432	可染β-D-吡喃葡萄糖多糖	蓝色	10
ConA-iFlour 555;iFluor 555标记刀豆蛋白A	559	570	α多糖	绿色	50
Rhodamine B;罗丹明B	559	580	非特异性蛋白染料	黄色	10
Syto9	488	498	核酸	绿色	50
PI;碘化丙啶	559	615	核酸（无法穿过完整细胞膜）	红色	0
Nile blue A;尼罗蓝	633	660	非特异性蛋白	蓝色	0
Syto63	633	673	可染全部细胞	深红色荧光	50
SYBR GreenⅠ	488	522	核酸	绿色	20
DCFH-DA;2,7;二氯荧光素二乙酸酯	488	525	ROS染料	绿色	50
DHE;二氢乙锭	518（535）	616	ROS染料	红色	50