【摘要】 LSCM 最基本的优势在于利用激光代替传统场光源，通过空间过滤技术消除了聚焦平面以外的次级荧光等信号干扰，可对较厚的样本进行显微 CT，整体对比度提高，从而使得分析区域内的图像更为清晰。

六、激光扫描共聚焦显微镜的发展优势

1、 更高的清晰度和分辨率

LSCM 最基本的优势在于利用激光代替传统场光源，通过空间过滤技术消除了聚焦平面以外的次级荧光等信号干扰，可对较厚的样本进行显微 CT，整体对比度提高，从而使得分析区域内的图像更为清晰。同时，ZOOM 功能可使其在不改变物镜的前提下对样本进行放大扫描，只要数值孔径满足要求，即可反映物镜的最佳分辨率，可达到与利用高放大率、低数值孔径物镜直接获取的无放大图像一样的效果。在 X/Y 平面，LSCM 的分辨率比传统光学显微镜提高了 1.4倍。

 

2、从二维平面迈向三维空间

由上文中所阐述的构造原理可见，LSCM 在可以清晰地获得 XY 平面内的光学切片的同时，还能够通过控制装有马达的载物台沿 Z 轴方向移动来调节样本扫描过程，在 Z 轴不同层面上连续断层扫描，得到样本横向纵深平面结构。利用如此逐层扫描得到一系列高反差高分辨率、高灵敏度的二维图像，通过模拟样本三维旋转和空间变换的共聚焦三维重构软件，可以建立简单的三维图像，使人们探索微观世界的范畴从二维平面走向了三维空间。

 

3、 灵活多变的实时光波调控系统

LSCM 一方面可以通过在激光整合器后加入声光调制滤片系统实现局部光操作，即同时分别控制各个波段激光照射强度或者同一波段激光在任意时间的照射强度，对图像上特定区域进行扫描成像。另一方面可通过扫描单位内的滤光片转轮，使用不同程度的带通滤光片同时获取多标记荧光，与此同时还可在激发过程中采用顺序扫描的模式，减少了多色荧光间的波段叠加，比年了激发光对不同染料的交叉激发，实现了实时多通道荧光采集。通过如上灵活多变的光波调控系统，可以同时对 2-3 种不同的荧光染料分别标记的样品结构进行一次性观察，实现不同结构组分的定性和定量分析。