【摘要】 生物有氧代谢过程中会产生很多副产品,即在多种细胞内的酶体系中生成的氧气还原的产物
生物有氧代谢过程中会产生很多副产品,即在多种细胞内的酶体系中生成的氧气还原的产物,例如:氧离子,过氧化物和含氧自由基等,这些副产品被统称为活性氧(reactive oxygen species, ROS)。自由基(free radicals),是指带不成对电子的原子、分子、离子或原子团,含氧自由基就是以氧(O)为中心的活性基团。ROS中最常见的氧自由基有超氧化阴离子(O2-),过氧化氢(H2O2),过氧化自由基(ROO-)和氢氧自由基(OH-)等形式。ROS的主要来源是细胞的线粒体呼吸链,线粒体受外界刺激后,细胞ROS水平会升高。过量ROS反过来会对线粒体造成损伤,可能引发线粒体自噬。
ROS在疾病研究等方面具有重要的意义,过量的ROS可以氧化细胞膜结构、核酸和蛋白分子,引起其结构和功能障碍。ROS增多导致机体氧化应激反应(Oxidative Stress)造成细胞损伤,参与多种病理机制。同时ROS在调节细胞增殖、分化、代谢及免疫中也起着重要作用。
ROS在体内存在的半衰期仅为15秒左右,需要用非常敏感的方法对其进行检测。最常见的方法是使用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测。DCFH-DA可以自由穿过细胞膜,其本身不具有荧光,当它进入细胞内后,细胞内的酯酶会把它水解生成DCFH;而DCFH不能通透细胞膜,从而将探针装载进入细胞内;细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH从而生成有荧光的DCF;通过检测DCF的荧光即可测量细胞内活性氧的水平。检测细胞ROS的含量,可以了解ROS在细胞一些生理和病理状态中的变化,分析药物效应和相关机制,对于病理研究学具有重大意义。
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