【摘要】 理论上，非平均 DNA 结合染料似乎是评估 GSDME 膜通透性功能的理想选择。

本质上，细胞凋亡是一个遏制程序，为细胞吞噬作用准备细胞尸体。当吞噬能力不足时，凋亡细胞发生解体，同时释放细胞内容物，称为继发性坏死。由于继发性坏死细胞可引起炎症反应，深入了解驱动继发性坏死的潜在机制或分子对于治疗靶向具有重要意义。

 

Rogers 等人报道，gasdermin E (GSDME)是形成孔的 gasdermin 蛋白家族的成员和凋亡半胱天冬酶-3的底物，驱动继发性坏死[1]。事实上，通过碘化丙啶(PI)评估，Gsdme-/-巨噬细胞在依托泊苷(一种细胞凋亡诱导剂)刺激下表现出较低的质膜通透性。

 

然而，其他报道表明，GSDME 的丢失并没有导致在紫外线照射的 THP-1和 Jurkat T 细胞中通过 TO-PRO-3荧光 DNA 染料测量的质膜透化的差异动力学。同样，GSDME 的缺乏不影响抗 Fas 治疗后巨噬细胞中 YOYO-1荧光 DNA 染料测定的膜透性，进行细胞死活染色。

 

理论上，非平均 DNA 结合染料似乎是评估 GSDME 膜通透性功能的理想选择。这些染料进入并结合核 DNA，并允许检测失去膜完整性的细胞。它们中的大多数在与 DNA 结合时表现出很少甚至没有溶液荧光，并且大大提高了量子产率[2]。

 

然而，大多数这些染料最初被设计用于染色 DNA，然后再用于染色膜受损的细胞。虽然它们的结合和膜通过特性在很大程度上是未知的，所有这些细胞不平衡核染料都被用来测量质膜透化。重要的是，这些小的阳离子核染料中的一些显示出通过 p膜联蛋白通道介导的机制(YO-PRO-1和 TO-PRO-3)进入细胞，允许标记与 p膜联蛋白-1激活相关的早期凋亡细胞，并使其适用性在测量质膜透化方面存在问题。

 

  • Rogers C, Fernandes-Alnemri T, Mayes L, Alnemri D, Cingolani G, Alnemri ES. Cleavage of DFNA5 by caspase-3 during apoptosis mediates progression to secondary necrotic/pyroptotic cell death. Nat Commun. 2017;8:14128.
  • Gill JE, Jotz MM, Young SG, Modest EJ, Sengupta SK. 7 Amino actinomycin D as a cytochemical probe. I. Spectral properties. J Histochem Cytochem. 1975;23:793–9.

 

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