【摘要】 一些人工制品是由于化学/物理技术的局限性和样品的性质造成的;其他人工制品是有意引入的，

几十年来，透射电子显微镜(TEM)已被广泛用于研究毛囊的形态发生(图1)。以电子显微镜为基础的技术正在迅速增长(如电子断层扫描，体积显微镜和元素映射)。随着这些新方法被纳入毛囊研究，我们应及时提醒自己，TEM的成功和数据质量更多地取决于样品制备方法，而不是在成像期间或之后的任何可能的调整。当成像时，我们希望看到形态冻结在生活中的地方，空间尺度小于一纳米。

 

然而，在体内和成像之间的每一步都会引入人工制品。一些人工制品是由于化学/物理技术的局限性和样品的性质造成的;其他人工制品是有意引入的，例如重金属以对比天然由低原子量和大部分电子透明元素(例如H，C，N，O)组成的亚细胞结构(例如蛋白质或膜)。

 

图1选定事件的时间表强调瞬变电磁在毛囊研究中的重要性

 

毛囊球到成熟轴的毛发的形态发生是一个复杂的过程，积极生长毛发的生长期毛囊对于TEM1-3是一个具有挑战性的结构;比可以清洁，脱水和嵌入树脂的上皮毛发纤维的TEM更具挑战性。为了方便，我们重点讨论TEM样品制备技术用于评估生长期VI期毛囊，但大多数观点适用于毛囊周期的任何阶段。

 

卵泡包含多种细胞类型，每种细胞都有自己可变的表型。大多数上皮细胞类型经历细胞程序性死亡，并转化为角化物质没有膨胀，但具有高密度和先天的化学交联。构成近端卵泡球区的上皮细胞是活的，并且经历连续的细胞分裂，子细胞在远端迁移时分化。毛干和内根鞘(IRS)的发育细胞在向皮肤表面远端迁移时逐渐充满结构性角蛋白，导致密度梯度作为固定物扩散的屏障，使得实现统一固定具有挑战性。除了角蛋白的积累，细胞质的降解是细胞轴和IRS成熟的自然部分，但是这个自然过程可能很难与糟糕的样品加工区分开来。

 

随后的固定交联和由脱水引起的收缩可以改变卵泡形态的元素。此外，来自包埋，切片和染色的人工制品降低了TEM从原子到纳米尺度的分辨率。本综述涵盖了样品制备方法的发展(图2)，从卵泡收集到成像，检查导致哺乳动物毛囊高分辨率TEM的因素。

 

图2在TEM下观察卵泡处理过程中涉及的不同步骤。从固定到树脂包埋的处理步骤取决于所使用的应用和TEM技术。缩写——TEM透射电子显微镜；ET电子断层扫描；IEM免疫金电镜；CLEM相关光学和电子显微镜；VEM体积电子显微镜；DF-STEM-暗场TEM

 

1.Velamoor S, Mitchell A, Bostina M, Harland D. Processing hair follicles for transmission electron microscopy. Exp Dermatol. 2022; 31: 110–121. 

 

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