【摘要】 该方法可用于不需要极高精度和灵敏度的工作,例如,作为便携式快速筛选,测定天然产物体外抗恶性疟原虫的细胞毒性活性。
介绍人类疟原虫的适应性多功能性恶性疟原虫产生了许多多重耐药亚群,威胁到目前治疗该疾病的药物的有效性。为了避免这种危险,有必要继续寻找新的分子,开发出对抗寄生虫的药物。体外测定使快速筛选众多天然和合成化合物的生物活性成为可能。氚化次黄嘌呤(HX)测定是迄今为止最精确的体外测定方法之一,用于测量核酸前体与寄生虫DNA的结合。虽然该分析是半自动化的、可重复的和准确的,但由于它使用放射性同位素,它有一些缺点。开发了基于比色反应的测定方法,以解决与放射性同位素工作相关的一些困难。相关的染料也可以使用,如黄色的四氮唑染料,称为MTT,它被线粒体脱氢酶代谢减少,形成不溶于水的蓝色甲醛晶体MTT试验已被证明是一种快速和可重复的估计各种真核生物系统中细胞数量的方法,但迄今尚未用于测试抗恶性疟原虫的药物活性。该试验已被各种工作者修改过,Sladowski等人开发的方法16似乎最适合处理与使用寄生红细胞有关的特殊要求。Lazaro等人[1] 采用3-[4,5-二甲基噻唑-2-酰基]-2,5-二苯基溴化四唑(MTT)微培养四唑试验,在恶性疟原虫体外培养系统中估计氯喹、奎宁、青蒿素和阿托伐酮的50%抑制浓度。将MTT法与标准的氚化次黄嘌呤法和先前描述的2,2'-二对硝基苯-5,5'-二苯基-3,3'-[3,3'-二甲氧基-4,4'法进行比较。二苯二四唑氯(NBT)测定法。MTT方法能够在很大的药物浓度范围内给出细胞毒性剂量反应效应的概况。该方法可用于不需要极高精度和灵敏度的工作,例如,作为便携式快速筛选,测定天然产物体外抗恶性疟原虫的细胞毒性活性。
[1] Lazaro J E , Gay F .Plasmodium falciparum: In Vitro Cytotoxicity Testing Using MTT[J].J Biomol Screen, 1998.
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