生化试剂盒使用指南

摘要：

生化试剂盒是用于体外定量或定性检测生物样本中特定成分的预包装试剂组合，广泛应用于医学诊断、科研和生物制药等领域。

一、生化试剂盒介绍：

• 试剂组成

底物：与待测物发生反应的化学物质（如过氧化氢、NADH等）。

酶：特异性催化反应（如葡萄糖氧化酶、胆固醇酯酶等）。

缓冲液：维持反应体系的pH稳定。

显色剂/终止液：用于反应终点判断（如TMB、ELISA终止液）。

标准品/校准品：用于建立标准曲线，定量分析。

• 分类（方法学分类）

比色法（如Trinder反应测血糖）。

酶联免疫法（ELISA）：检测抗原/抗体。

紫外-可见分光光度法：如尿酸酶法测尿酸。

生化免疫联合检测（如化学发光法）。

• 产品优势

标准化操作：预装试剂，减少人为误差。

高灵敏度/特异性：通过酶促反应或抗体抗原结合提高准确性。

快速高效：多数检测可在10-30分钟内完成。

批间差小：工业化生产保证稳定性。

• 注意事项

储存条件：2-8℃避光保存，避免反复冻融。

质量控制：每批次使用质控品验证。

干扰因素：溶血、脂血样本可能影响结果。

检测范围：是否覆盖待测样本浓度。

灵敏度/精密度：CV值（变异系数）≤5%为佳。

二.生化试剂盒使用流程以及常见问题（微量法、分光光度法试剂盒为例）

1、试剂盒的运输

生化试剂盒一般采用冰袋运输；运输中冰袋已融化并不会影响其质量，请放心使用。

2、试剂盒的保存

收到后，请在预实验前及时确认各组分量是否与说明书标注的一致，若有疑问请及时与厂家技术联系（联系方式见说明书），拆开包装后，请按照每个试剂的保存温度保存。

3、试剂盒有效期

试剂盒大标签上显示试剂盒有效期，一般是3个月或6个月（具体以大标签为准）。粉体试剂加溶液后的保存周期，可参照说明书中“备注”一栏的说明（也可联系说明书下方的技术支持咨询确认）。  

4、预实验五步法

强烈建议选取2-3个预期结果差别较大的样本做预测定。

目的：了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

第一步：将试剂盒内的纸质版说明书通读一遍，核查试剂数量、状态（粉体、液体）及各组份的量与说明书是否一致，若无异常则按照规定温度存放。

第二步：临用前取出试剂，溶解或者恢复至室温，以待使用。

第三步：选择差异大的2-3个样本进行研磨提取，取上清液备用。

第四步：根据说明书操作步骤进行预实验。

第五步：待预实验确定好样本检测浓度、调整情况后，再批量进行正式实验。

5、分光法（F）与微板法（W）的区别

分光法是指使用紫外可见分光光度计或可见分光光度计检测，分光法试剂盒需要使用石英或玻璃比色皿；其规格是：光径：1cm,容积：1mL, 狭缝宽：3mm

微板法指使用全波段连续酶标仪检测。微板法试剂盒需要使用96孔酶标板或UV板，其规格是：U型底或平底、最大孔容量  300μL

6、普通酶标板与UV板的区别？

使用酶标仪检测时，如果波长大于等于340nm,使用普通的96孔板；但是波长小于340nm时，需要使用UV板（紫外酶标板）；UV板（PS聚苯乙稀石英底）价格比较贵，但是可以清洗，重复使用。一般建议重复使用3-5次；

7、分光法与微板法试剂盒能混用吗？

不可以。两者原理几乎一样，但因反应体系、样本用量、试剂浓度、仪器和耗材都不同，并且混用后结果的准确性不能保证，不建议混用与任意改变体系。

8、市面上见到的50T/48S；100T/96S;120T/100S是什么意思？

T:指测试（Test）次数；在实验室中，这通常指的是反应孔；每个反应孔可以是一个实验样本，或者对照；并不代表测的样本个数。50T是50个反应孔，不一定代表测50个样本；   

S：指可以测试的样本（Sample）个数；48样、96样：指可以检测48个样本、96个样本（不含重复）即得到48个、96个数据结果。

9、试剂盒规格标注的“48样”、“96样”是什么意思呢？

“48样”、“96样”是试剂盒规格，定义了试剂盒可以测多少样，对于试剂盒需要的试剂量都给足的；一般会给到超出需用量的10-20%

48样、96样：指可以检测48个样本、96个样本（不含重复）即得到48个、96个最终的数据结果。一般试剂盒48样可以测不少于50个样本；96样指可以测定不少于100个样本。

10、标准曲线是否需要重新做？

一般不建议重新做标准曲线，标准曲线绘制会损耗试剂量，不够测到试剂盒规格的样本数量，另外试剂盒给的标准曲线一般是可以溯源，保证标曲的客观、真实、科学严谨，可以直接使用。

11、什么是冰浴匀浆？

（1）使用研钵匀浆：将研钵置于冰盒上匀浆即冰浴匀浆。称取样本置于研钵中，研钵和提取液提前预冷或将研钵置于碎冰、冰盒上，加入一半量的提取液研磨均匀，转移至离心管中，再向研钵中加入另一半量的提取液涮洗研钵，转移至同一离心管中合并；

（2）使用匀浆机进行匀浆：先把研磨模块提前放到-20℃预冷；然后将称好的组织放入离心管中，加入适量预冷的提取液、钢珠，按照匀浆机要求设定参数，进行研磨，动物植物组织都可以，对于纤维含量高，难磨样本可以提高赫兹和延长时间。或者多次反复研磨

（3）使用液氮研磨后匀浆：样本液氮研磨成粉后，加入提取液再次按照（1）、（2）的方式研磨，或者放入超声波清洗仪300W超声5min，超声全程温度不得超过10℃。

12、样本的保存

测常规指标，样本保存在-80℃下，一年以上都可以测；保存在-40℃下，半年之内都可以测；保存在-20℃下，三个月都没问题。

（https://www.geruisi-bio.com/article/60.html）

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