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蛋白质谱鉴定
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项目简介
项目介绍
蛋白质谱技术简单来说就是一种将质谱仪用于研究蛋白质的技术。
目前科学指南针提供的方法是使用蛋白酶（例如胰蛋白酶）将蛋白质酶解为较小的肽，随后，利用质谱仪并通过肽质谱指纹图谱或串联质谱法进行鉴定，因此，这种方法是在肽水平上来鉴定推断蛋白质。与完整蛋白质相比，这种更小且更均匀的片段更易于分析，并能提高鉴定的精确度。
交付内容
检测报告（含测试流程，仪器型号等），交付时间3-4周，根据实验进展定，可能会变化。结果反馈请在测试完成一周内反馈给指南针工作人员。
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结果展示
图1 蛋白质谱Basepeak图
图2 蛋白质谱图
样品要求
送样要求
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样本类型 |
最低送样量 |
预处理及保存 |
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胶点 |
2D 胶点 |
肉眼可见 |
用移液枪头将 2D 点挖下来，转入 EP 管中，做好标记，冰袋寄送 |
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胶条 |
SDS-PAGE 条带 |
肉眼可见 |
将需要鉴定的 SDS-PAGE 条带切下，转入 EP 管中，做好标记，冰袋寄送 颜色非常浅的条带可取多个重复样本放一起 |
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蛋白 |
冻干粉 |
50ug |
样品转入 EP 管中，做好标记，冰袋寄送 |
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蛋白溶液 |
20ug以上的蛋白量（且蛋白浓度不低于0.1 μg/μL） |
样品转入EP管中，做好标记，冰袋或干冰寄送 Buffer要求：溶液中不能含有Triton100、NP40、CHAPS等去垢剂 |
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培养基 |
15 mL以上 |
培养基样本不含血清或添加人工生物营养素； 根据细胞或菌体的蛋白分泌和细胞状态确认收集持续时长； 培养基样本需要经过过滤去掉细胞成分； 500 g离心5分钟去掉原培养基，使用无血清培养基清洗细胞三遍，用无血清培养基培养细胞24 h以上；500 g离心5分钟收集培养基；使用0.22 μm的滤膜过滤去除细胞或菌体；液氮速冻，-80 ℃保存，干冰寄送。 |
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动物组织 |
常规动物组织（心、肝、脾、肺、肾、肠、脑、肌 肉等） |
100mg |
PBS 洗涤去除残留血液和污染物，迅速剥去脂肪和筋皮等结缔组织，冲洗干净，用组织剪或手术刀将组织分离成 1cm3 左右的小块，液氮速冻，保存于-80℃ |
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软骨组织 |
100mg |
PBS 洗涤，用手术刀将软骨切成 1cm3 左右的小块，液氮速冻，保存于-80℃ |
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软体动物（吸虫等） |
100mg |
PBS 洗涤去除来自宿主的污染，液氮速冻，保存于-80℃ |
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植物组织 |
大本植物茎、叶、花等 |
200mg |
PBS 清洗，吸水纸吸去表面液体，液氮速冻，保存于-80℃ |
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大本植物树根、树皮、树枝等 |
200mg |
PBS 清洗，吸水纸吸去表面液体，液氮速冻，保存于-80℃ |
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种子 |
500mg |
PBS 清洗，吸水纸吸去表面液体，液氮速冻，保存于-80℃ |
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果肉 |
2g |
去皮切成 1cm3 左右小块，液氮速冻，保存于-80℃ |
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草本植物、藻类、蕨类等 |
200mg |
PBS 清洗，吸水纸吸去表面液体，液氮速冻，保存于-80℃ |
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花粉 |
200mg |
植物开花期收集花粉，解剖显微镜下检查花粉，用解剖针去除花药碎片等杂质，转入 EP 管中，光学显微镜下检查花粉的形态和纯度，保存于-80℃ |
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微生物 |
细菌类 |
200mg |
3000rpm-5000rpm 离心 5-15min，去上清，PBS 洗涤沉淀三次，液氮速冻，保存于-80℃ |
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真菌类（菌菇） |
2g |
PBS 清洗，吸水纸吸去表面液体，液氮速冻，保存于-80℃ |
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细胞 |
悬浮培养细胞 |
10^6 个 |
400rpm-1000rpm 离心 10 分钟收获细胞，弃上清，用预冷的 PBS 小心洗涤片状沉淀物 2 次，置于冰上， 去上清，液氮速冻，保存于-80℃ |
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贴壁培养细胞 |
10^6 个 |
1.弃掉培养液，并将培养皿倒置于吸水纸上吸干培养液； 2.加入 4℃预冷的 PBS，平放轻轻摇动 1 分钟洗涤细胞，然后弃去 PBS，重复以上操作两次以洗去培养液 3.将培养皿置于冰上，向培养皿内加入 4℃预冷的 PBS，用干净的细胞刮棒将细胞刮于培养皿的一侧（动作要快），冰上斜置培养皿，使得缓冲液流向一侧，用移液管吸取溶解产物至预冷的离心管内，离心去上清。 4.液氮速冻，保存于-80℃。 |
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体液 |
血清 |
100ul |
收集好的全血室温静置两小时，3000rpm 离心 10min，取上清，液氮速冻，保存于-80℃ |
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血浆 |
100ul |
收集好的全血加入抗凝剂，室温静止 30 分钟，1300rpm-2000rpm 离心 10min，取上清，液氮速冻，保存于-80℃。 |
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尿液 |
10ml |
5000rpm 4°C 离心 30-60min，取上清， 保存于-80℃。 |
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唾液 |
1ml |
禁食两小时以上，上午取样，1000rpm-2000rpm 离心 5min，（或使用 0.22μm 滤膜过滤），取上清，保存于-80℃。 |
样品寄送要求
1.样品管上名称和表中样品编号务必保持一致，除名称以外，请勿将其他信息标记于管盖，以避免出现可能的识别错误，后续分析报告按样品编号输出。
2.锡纸包装的组织样品，将样品名称写在标签纸上并和样品一起装入塑封袋中，避免低温冰冻造成的样品名称无法识别。
